Bioadhesividad celular <i>in vitro</i>

Abstract

Los cultivos 2D presentan limitaciones en su capacidad de simular lo que sucede in vivo. En la ingeniería de tejidos, se necesita afianzar la adhesividad y proliferación celular. El objetivo de este trabajo fue estudiar la adhesión in vitro de las células madre en cultivo 2D y la reorganización celular mediada por matriz extracelular. Se extrajeron pulpas de terceros molares con indicación de exodoncia, según protocolo del Laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología y Comité de Bioética. Los explantes obtenidos se cultivaron en condiciones estándar, que las células alcanzaron un 80% de confluencia. Se realizó el conteo de células y se determinó la proliferación celular a partir del tercer subcultivo. Los cultivos seleccionados fueron fijados con metanol y coloreados con HE. El análisis morfológico fue efectuado mediante microscopio invertido de contraste de fases (Leica DM IL LED). Las Células Madre Pulpares aisladas mostraron un óptimo crecimiento. Se observó morfológica típica de fibroblastos fusiformes. En algunos subcultivos, se observó la presencia de agregados celulares y mostraron cambios morfológicos sugerentes a posible diferenciación espontánea. Zonas de matriz extracelular se observó en subcultivos de los últimos pasajes. Coincidimos con otros autores sobre la diferenciación espontánea de las Células Madre Pulpares sin añadir un medio inductor, siendo la bioadhesividad el factor primordial.

2D cultures have limitations in their ability to simulate what happens in vivo. In tissue engineering, it is necessary to strengthen cell adhesiveness and proliferation. The objective of this work was to study the in vitro adhesion of stem cells in 2D culture and cell reorganization mediated by extracellular matrix. Pulps were extracted from third molars with indication for extraction, according to the protocol of the Laboratory of Molecular Biology and Biotechnology and the Bioethics Committee. The obtained explants were cultured under standard conditions, that the cells reached 80% confluence. Cells were counted and cell proliferation was determined from the third subculture. The selected cultures were fixed with methanol and stained with HE. Morphological analysis was carried out using an inverted phase contrast microscope (Leica DM IL LED). Isolated Pulp Stem Cells showed optimal growth. Typical morphology of spindle fibroblasts was observed. In some subcultures, the presence of cell aggregates was observed and they showed morphological changes suggestive of possible spontaneous differentiation. Extracellular matrix areas were observed in subcultures of the last passages. We agree with other authors on the spontaneous differentiation of Pulp Stem Cells without adding an inducing medium, being bioadhesiveness the primary factor.