Utilización del diseño central compuesto para evaluar la robustez de un método de CLAR

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la robustez del método CLAR-fase invertida, previamente validado, para separación y cuantificación de catequina y epicatequina. La robustez fue investigada por medio de un diseño central compuesto, las variables independientes fueron concentración de ácido acético y proporciones iniciales de acetonitrila y las variables dependientes fueran el tiempo de retención, el factor de capacidad y la resolución de ambos picos. El ensayo fue realizado utilizando una columna C18 y ácido acético-acetonitrilo como fase móvil, sistema de elución gradual y detección UV en 280 nm. Todas las respuestas mostraron un comportamiento similar, excepto la resolución de la epicatequina. La proporción de acetonitrilo influenció todas las variables dependientes significantemente, disminuyendo las respuestas en el caso de altos niveles. La concentración de ácido acético presentó menor influencia en las repuestas.

The purpose of this work was to evaluate the preliminary robustness of a RP-LC methodology developed and validated for separation and quantification of catechin and epicatechin. The robustness was investigated by a central composite design, where the concentration of acetic acid solution and the initial proportion of acetonitrile were the independent variables, the dependent variables were the retention times, capacity factor and resolutions of both peaks. The analysis was performed using a C18 column with acid acetic-acetonitrile mobile phase employing gradient elution and detection by UV at 280 nm. Except for the resolution of epicatechin other responses showed a similar performance. While the initial proportion of acetonitrile significantly influences all dependent variables decreasing the responses as the concentration of acetonitrile is higher, the acid concentration has a minor influence.