Protocolo de fijación de muestras para microscopía electrónica de barrido: caracterización de gránulos anaeróbios de un biodigestor de laguna

Abstract

En el proceso de biogasificación, una comunidad microbiana de anaerobios estrictos y facultativos es la responsable de la digestión de la biomasa sustrato a monómeros, su fermentación y finalmente su metanogenización. Como resultado se obtiene biogás, un biocombustible que está compuesto principalmente de metano (CH₄), seguido de dióxido de carbono (CO₂) y trazas de otros gases. La comunidad microbiana biogasificante estudiada en este trabajo está organizada en forma de gránulos que poseen dimensiones de 0,2 a 7 mm. Para caracterizar los gránulos se utilizaron diversas técnicas y entre ellas la Microscopía Electrónica de Barrido. Ante la diversidad de microorganismos y las dimensiones del gránulo se buscó un protocolo, que permita observar detalladamente los diversos microorganismos y el material polimérico extracelular (MPE), posiblemente secretado por los mismos. El MPE actuaría como cementante, facilitando la unión y agregación de los microorganismos y de otra materia orgánica e inorgánica. En la bibliografía, en general se propone la utilización de glutaraldehído, amortiguado con cacodilato, y tetróxido de osmio, con los que se obtiene muy buenos resultados. El objetivo de este trabajo es desarrollar protocolos alternativos más económicos, capaces de brindar resultados comparables con los de las fijaciones y postfijaciones antes mencionadas. Para la fijación de las muestras se probó: la fijación en vapores de alcohol, la fijación en paraformaldheído 4% en buffer fosfato salino (PBS) y la fijación en una solución de paraformaldehído, alcohol etílico y ácido acético (FAA específico).