Análisis de morfología mitocondrial semi-automatizado enimágenes de cultivos neuronales derivados de IPSCs usandoFIJl/lmageJ

Abstract

El uso de imágenes de microscopía de fluorescencia y confocal es un pilar fundamental para los trabajos de investigación en ciencias biológicas. En este contexto, el análisis cuantitativo no sesgado de dichas imágenes es clave para lograr resultados reproducibles y comparables entre sí. Sin embargo, en muchos casos, esto puede resultar complicado debido a la naturaleza de las imágenes o del fenómeno a evaluar. En particular, el estudio de la morfología mitocondrial presenta la dificultad adicional de que las estructuras de interés poseen geometrías complejas y muy variables. En este trabajo presentamos un protocolo de procesamiento semi-automatizado empleando FIJI (lmageJ) para segmentar mitocondrias marcadas con Mito Tracker Red (lnvitrogen) y extraer diversos parámetros morfológicos de interés a partir de un set de imágenes de microscopía confocal. Las imágenes fueron obtenidas de cultivos de neuronas diferenciadas a partir de IPSCs (células madre pluripotentes inducidas) derivadas de pacientes con distintas mutaciones asociadas a la enfermedad de Alzheimer y potencialmente implicadas en el metabolismo energético. El análisis fue realizado como parte de un servicio de la unidad de microscopía de la Fundación Instituto Leloir y por lo tanto fue ciego a la identidad de los grupos de imágenes.