Desarrollo de vectores baculovirales inducibles y de larga duración aplicados a la terapia génica contra adenocarcinoma pulmonar

Abstract

El cáncer es un conjunto heterogéneo de enfermedades caracterizadas por la proliferación descontrolada de células con capacidad de invadir tejidos y diseminarse a órganos distantes. Su progresión, impulsada por la inestabilidad genómica y la selección clonal, genera una marcada heterogeneidad tumoral y favorece la desregulación de procesos celulares clave. En este contexto, la resistencia a los tratamientos constituye uno de los principales desafíos clínicos y una causa significativa de mortalidad, asociándose, entre otros mecanismos, a la sobreexpresión de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP). En esta tesis se analizó el rol de la familia IAP en el adenocarcinoma de pulmón, con especial énfasis en BIRC6. El análisis de la base TCGA-LUAD mostró que BIRC6 se encuentra significativamente sobreexpresado en tumores primarios respecto del tejido normal y se correlaciona positivamente con XIAP. La elevada expresión de BIRC6 se asoció además con la activación de vías vinculadas a proliferación tumoral y respuesta al daño del DNA, en particular recombinación homóloga y señalización ATM/ATR. Estos hallazgos fueron reforzados por análisis de transcriptómica espacial, que evidenciaron que las regiones con alta expresión de BIRC6 presentan un aumento de genes de reparación del DNA y activación del fenotipo secretor asociado a senescencia (SASP), contribuyendo a un microambiente tumoral protumoral e inmunosupresor. En este marco, se desarrolló un baculovirus recombinante para silenciar BIRC6 y se evaluó su efecto en modelos de adenocarcinoma de pulmón. El silenciamiento fue validado in vitro mediante qRT-PCR e inmunofluorescencia, y se analizó su impacto en la inducción de apoptosis. Asimismo, se estudió el efecto del silenciamiento de BIRC6 sobre la progresión tumoral en modelos singénicos heterotópicos in vivo. Considerando las limitaciones de los tratamientos convencionales y el rol de transportadores de eflujo como MDR1 en la resistencia adquirida, se desarrolló una estrategia de terapia génica basada en baculovirus recombinantes. Esta estrategia de doble regulación permitió obtener una expresión de transgenes específica de tumor, inducible por quimioterapia y sostenida en el tiempo, mediante la combinación de los promotores pMDR1 y COX2 junto con un sistema de recombinación sitio-específica mediado por FLPo. El sistema bipartito demostró su funcionalidad en células de adenocarcinoma de pulmón y confirmó la activación del promotor pMDR1 en presencia de agentes quimioterapéuticos, destacando su potencial en terapias combinadas. En conjunto, este trabajo permitió caracterizar a BIRC6 como un regulador clave de la progresión tumoral y la resistencia terapéutica en adenocarcinoma de pulmón, y validarlo preclínicamente como un blanco terapéutico prometedor. Asimismo, se propone una estrategia de doble regulación que refuerza el potencial de los baculovirus como vectores versátiles para el desarrollo de terapias génicas dirigidas en oncología.