Estudios de patrones de infección de iflavirus en Apis mellifera

Abstract

El presente trabajo de tesis tuvo como finalidad la detección, purificación y caracterización de cepas locales del virus de la cría ensacada (SBV) y el virus de las alas deformadas (DWV). A partir de muestras de campo, se identificó la presencia de ambos virus y posteriormente se purificaron mediante centrifugación y filtrado diferencial. En el caso de DWV, se seleccionaron cuatro purificados para su análisis genético, mediante el diseño de primers específicos se secuenciaron regiones genómicas representativas, revelando que tres de los aislados correspondían a la variante DWV-A y uno a la variante DWV-B. A partir de estos purificados, se estandarizaron modelos experimentales de replicación viral in vivo: SBV en larvas, y DWV en pupas y abejas adultas, acorde a sus principales rutas de transmisión. Paralelamente se ensayaron sistemas de replicación in vitro utilizando cultivos celulares primarios de abejas y líneas celulares comerciales (Hi-5 y SF-9). No obstante, se observaron limitaciones importantes para el mantenimiento de cultivos primarios, por la presencia de virus adyacentes no deseados en los inóculos y, finalmente no se detectó replicación viral en líneas comerciales probadas. Posteriormente se realizó una cuantificación y distribución tisular de DWV, detectando altas cargas virales en el tórax y cabeza, lo que refuerza el tropismo tisular de DWV por tejidos musculares y neurales en etapas más avanzadas de la infección. Finalmente se evaluó la dinámica de expresión de genes inmunológicos en abejas infectadas con DWV, observando la activación la vía Toll de manera sostenida durante 7 días posinfección y una activación transitoria de las vías de ARN interferente y Jak/Stat, que refuerza la hipótesis que el virus de las alas deformadas puede modular la respuesta inmune del hospedador. Estos resultados sientan las bases para futuras investigaciones enfocadas en el desarrollo de estrategias antivirales.