Verbena bonariensis L. (Verbenaceae) es una planta autóctona de Argentina con uso medicinal tradicional, cuyas propiedades farmacológicas no habían sido previamente validadas de manera científica. El presente trabajo tuvo como objetivo realizar un estudio fitoquímico y evaluar la actividad biológica de sus extractos (tintura hidroalcohólica e infusión acuosa) como fuente de compuestos bioactivos con potencial terapéutico. El análisis fitoquímico demostró que V. bonariensis es una fuente relevante de metabolitos secundarios, particularmente compuestos fenólicos, ácidos hidroxicinámicos y flavonoides, con un perfil comparable al de Verbena officinalis. El análisis por HPLC-DAD confirmó la presencia de verbascósido y la cromatografía en capa delgada sugirió la presencia de flavonas como luteolina y apigenina. El método de extracción hidroalcohólico resultó más eficiente que la infusión acuosa para la recuperación de metabolitos de diversa polaridad. La actividad antioxidante evaluada mediante los ensayos DPPH, ABTS y quelación de hierro (ferrozina) mostró una capacidad antioxidante multifactorial significativa en ambos extractos, con valores de CE₅₀ comparables a los descritos para especies relacionadas del género. En cuanto al perfil de seguridad, la tintura no produjo toxicidad ni mortalidad a 2000 mg/kg por vía oral e intraperitoneal, mientras que la infusión fue segura por vía oral a la misma dosis. La evaluación de citotoxicidad en la línea celular SH-SY5Y permitió determinar concentraciones no citotóxicas para los estudios farmacológicos. Los ensayos farmacológicos en modelos murinos demostraron que ambos extractos reducen significativamente el tiempo de inmovilidad en el test de nado forzado y en el test de suspensión de la cola, evidenciando una actividad simil-antidepresiva. El estudio de mecanismos de acción reveló la participación de sistemas monoaminérgicos (serotoninérgico, dopaminérgico y noradrenérgico) y del sistema nitrérgico (isoformas constitutivas de la NOS, excluyendo su isoforma inducible (iNOS)), descartando la vía glutamatérgica NMDA. Asimismo, ambos extractos produjeron un efecto sedante leve en el test de campo abierto, no mediado por receptores benzodiacepínicos. No se observó actividad ansiolítica ni antiespasmódica/antidiarreica concluyente en las condiciones estudiadas. En ensayos in vitro, la tintura inhibió significativamente la actividad de la h-MAO-A y la h-MAO-B, aportando sustento mecanístico directo para los efectos antidepresivos y un potencial componente neuroprotector. En conjunto, los resultados posicionan a Verbena bonariensis como una especie con potencial farmacológico relevante, especialmente como agente antidepresivo y sedante leve de origen natural.