Aislamiento de amebas de vida libre en muestras de aguas ambientales

Abstract

Las amebas de vida libre (AVLs) son protozoos cosmopolitas anfizoicos. Los géneros reconocidos como causantes de patología en humanos son Naegleria, Acanthamoeba, Balamuthia y Sappinia. Dada su ubicuidad y la posibilidad de encontrar especies patógenas, el objetivo del presente trabajo fue la búsqueda, aislamiento y caracterización de protozoos del género Acanthamoeba y Naegleria en muestras de agua, recolectadas en primavera, en distintas zonas de la Ciudad de Berisso, provincia de Buenos Aires, en puntos donde se realizan actividades recreativas acuáticas. Se estudiaron 5 muestras correspondientes al Arroyo El Saladero, Playa Palo Blanco, Cantera de conchilla, Arroyo El Pescado y Playa La Balandra. Se recolectaron a 35 cm de profundidad en recipientes estériles y se midieron temperatura y pH. Se analizaron por cultivo en agar no nutritivo cubierto con una cepa de Escherichia coli en crecimiento exponencial, a 370 C y a 420 C y realizando observaciones hasta 14 días. En caso de observar AVLs, la identificación genérica se realizó según la morfología por microscopía y se estudiaron, además, por biología molecular. Se extrajo el ADN genómico. Se amplificó y tipificó por PCR aplicando los protocolos descritos por Schroeder, y Regoudis y Pélandakis. El pH y la temperatura del agua oscilaron entre 6 y 7 y entre 19.50 C y 21.60C respectivamente. No hubo desarrollo a 420C, descartando al género Naegleria. Se aislaron AVLs en 3 de las 5 muestras a 370C, dando positivo para Acanthamoeba spp. por biología molecular las muestras correspondientes al Arroyo El Saladero y Playa Palo Blanco. La muestra restante, recolectada en Playa La Balandra dio negativo por PCR, por lo que ese desarrollo correspondería a un género de AVL distinto a Acanthamoeba. Los hallazgos indicaron condiciones favorables de crecimiento de AVLs en sitios de alta concurrencia humana, por lo que es necesario estar alerta.

Free-living amoebae (FLAs) are amphizoic cosmopolitan protozoa. The genera recognized as causing pathology in humans are Naegleria, Acanthamoeba, Balamuthia and Sappinia. Because of their ubiquity and the possibility of finding pathogenic species, the objective of this work was the search, isolation and characterization of protozoa of the genera Acanthamoeba and Naegleria in water samples, collected in spring, in different areas of the City of Berisso, province of Buenos Aires, at points where aquatic recreational activities are carried out. Five samples corresponding to Arroyo El Saladero, Playa Palo Blanco, Cantera de conchilla, Arroyo El Pescado and Playa La Balandra were studied. They were collected at a depth of 35 cm in sterile containers. Temperature and pH were measured. They were analyzed by culture in non-nutritive agar covered with a strain of Escherichia coli in exponential growth, at 37C and 42C and making observations up to 14 days. Generic identification was carried out according to their morphology by microscopy and in those cases that FLAs were observed, they were also studied by molecular biology. Genomic DNA was extracted, amplified and typified by PCR applying the protocols described by Schroeder and Regoudis and Pélandakis. The pH and the temperature of the water oscillated between 6 and 7 and between 19.5 C and 21.6C respectively. There was no development at 42C, ruling out the genus Naegleria. FLAs were isolated in 3 of the 5 samples at 37 C, corresponding to Arroyo El Saladero and Playa Palo Blanco giving positive for Acanthamoeba spp. by molecular biology. The remaining sample, collected at Playa La Balandra, was negative by PCR, so this development corresponded to a genus of FLAs other than Acanthamoeba. The findings indicated favorable conditions for the growth of FLAs in places with high human attendance, so it is necessary to make a vigilance.