Estudio estructural de proteínas de Trypanosoma cruzi

Abstract

La enfermedad de Chagas es causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi y es transmitida a humanos por el insecto vector Triatoma infestans. Tiene una prevalencia general estimada en 6-8 millones de casos y 65-100 millones de personas en riesgo de contraer la infección. Actualmente, no hay vacunas disponibles y las drogas utilizadas en el tratamiento muestran efectos secundarios indeseables. La creciente comprensión de las vías bioquímicas de T. cruzi ha permitido la identificación de nuevos posibles blancos para el desarrollo de futuras drogas, que incluyen enzimas importantes para la sobrevida del parásito. Las adenilato quinasas (ADKs) son enzimas que juegan un papel clave en el metabolismo energético del parásito. El rol energético de adenilato quinasa ha cobrado importancia luego del descubrimiento de que esta enzima facilita la transferencia y la utilización de grupos fosforilo γ y β en la molécula de ATP a través de una serie de reacciones secuenciales que son vitales para el parásito. Es importante destacar, que la Adenilato Kinasa 1 de T. cruzi (TcAdK1) posee diferencias con su homóloga humana fundamentalmente en su extensión N-terminal característica. El objetivo principal de este trabajo es el estudio estructural de la proteína TcADK1 por técnicas bioinformáticas y cristalografía de rayos-X. Se han construido modelos por homología para la proteína en estudio utilizando el programa Modeller, complementariamente se obtuvieron modelos tridimensionales con Alphafold2. También se estudió la formación de oligómeros realizando ensayos de docking utilizando las herramientas ClusPro, HDOCK, AlphaFold2 y PISA. Se puso a punto la sobreexpresion y purificion de la proteína TcAdK1 para la obtención de la proteína en alto grado de pureza que permiten la realización de ensayos cristalográficos. A partir de los "screening” mediante microbatch, se obtuvieron cristales de TcAdK1 en diferentes condiciones. Luego se realizó la optimización de dichas condiciones mediante Hanging drop obteniendo cristales de la proteína de mejor calidad. Esto nos permitirá avanzar a la difracción de rayos X.