Diagnóstico de la paratuberculosis bovina a través de un ELISA úrea utilizando proteína G

Abstract

La proteína G proveniente de Streptococcus es conocida por su capacidad para unirse específicamente a la fracción Fc de las inmunoglobulinas (IgG) de diferentes mamíferos. Esta característica puede utilizarse en técnicas como el ELISA, optimizando la detección de anticuerpos específicos en diversas muestras biológicas (como el suero, plasma o leche). El diagnóstico de la paratuberculosis bovina (ptbc) utilizando la prueba de ELISA es una de las herramientas de control ampliamente aplicada en nuestra región. El objetivo de este trabajo es comparar los resultados del uso de la proteína G conjugada con peroxidasa y del conjugado anti-IgG bovina en la prueba de ELISA urea "in house”, utilizada rutinariamente en nuestro laboratorio para el diagnóstico de ptbc. En esta etapa se analizaron 56 sueros de nuestra seroteca provenientes de diversos establecimientos considerados en saneamiento de esta enfermedad. Dichos sueros fueron categorizados como positivos, sospechosos y negativos. Se siguió el protocolo de la prueba de ELISA urea (Alvarado P. y col., 2019), utilizando un antígeno lisado completo de M. avium subsp. avium cepa D4ER, agregando luego urea 8 M durante 4 minutos previo a la incorporación del conjugado. Se compararon las densidades ópticas (DO) obtenidas para dichos sueros al utilizar en el ELISA el conjugado anti-IgG bovina (Sigma-Aldrich®) y la proteína G conjugada con peroxidasa (Thermo Fisher Scientific®, Invitrogen). Los resultados analizados con la prueba T de Student, demostraron diferencia significativa entre grupos (p= 1,33E-07), observándose una menor varianza al usar la proteína G en relación a los valores promedios y de dispersión de las DO de la prueba (gráfico). La prueba de ELISA urea "in house”, representa una alternativa de menor costo comparada con los kits comerciales, y permite continuar mejorando la técnica, ajustar puntos de cortes, titular los reactivos, modificar el antígeno, entre otras variables. El uso de la urea en esta prueba elimina las uniones Ag-Ac de baja avidez, y la alta afinidad de la proteína G conjugada por la fracción Fc de IgG de diversas especies permite, al combinarlas en la prueba de ELISA, optimizar las características operativas de la prueba y, por lo tanto, el diagnóstico de esta enfermedad.