Diagnóstico de paratuberculosis bovina mediante ELISA etanol de Mycobacterium avium subsp. avium

Abstract

El test de ELISA indirecto utilizado para el diagnóstico y control de paratuberculosis bovina (ptbc) en rodeos puede arrojar resultados falsos positivos. Ya sea por reactividad cruzada con otras micobacterias, o debido a la cronicidad y compleja inmunopatogenia de la enfermedad. Según bibliografía, la extracción etanólica sobre micobacterias contiene antígenos de superficie de la pared celular. Siendo estos últimos hipotéticamente más específicos; por lo cual su aplicación en un ELISA podría optimizar las condiciones antes mencionadas. El objetivo de este trabajo fue evaluar el desempeño diagnóstico de un extracto etanólico (eet) de Mycobacterium avium subsp. avium cepa D4ER aplicado en un ELISA de ptbc desarrollado en nuestro laboratorio, y contrastarlo con un lisado completo (wla) de la misma cepa. El eet. se obtuvo según el protocolo descripto por Eda y col. 2006; y el wla mediante lisis mecánica con disruptor celular (Constant Systems®). Se incluyeron en los dos ELISAs un total de 77 muestras de suero bovino con estatus de ptbc conocido mediante cultivo realizado a partir de muestras de materia fecal (29 positivos y 48 negativos). Se sensibilizaron placas de poliestireno de 96 pocillos (Greiner Microlon® F-Botton clear, High Binding) en dilución 1/960 v/v para el ELISA-eet y 1/480 v/v para el ELISA-wla con buffer carbonato bicarbonato pH 9,5. Obtenidos los porcentajes de positividad, se efectuó un análisis ROC con R core team® (pROC). No se encontraron diferencias significativas entre ambas AUC (p=0,38), el mejor punto de corte por índice de Youden para el ELISA-eet fue 54% con una sensibilidad del 93% y una especificidad del 94%. Para el ELISA-wla el mejor punto de corte fue del 59% con una sensibilidad del 96% y una especificidad del 87%. La obtención del eet resultó menos laboriosa que el wla. El ELISA-eet podría ser una alternativa diagnóstica confirmatoria, para la detección de seropositivos en rodeos con baja prevalencia de ptbc, o intentar la erradicación en contextos epidemiológicos puntuales. Estos resultados preliminares permitieron evidenciar el potencial diagnóstico del ELISA-eet, siendo importante considerar futuros ensayos longitudinales sobre animales infectados y sin signos clínicos, con el fin de evaluar su desempeño en estos animales.