Aislamiento y caracterización de un nuevo inhibidor de tripsina de morrón amarillo, con actividad inhibitoria del crecimiento de Cándida albicans

Abstract

En este trabajo se informa el aislamiento, purificación y caracterización de un nuevo inhibidor de tripsina aislado a partir de semillas de morrón amarillo (Capsicum annuum L.) sobre el cual se evalúa actividad antifúngica frente a diversas cepas de Cándidas. Dicho inhibidor (al que denominamos YBPTI) presentó una estabilidad fisicoquímica muy alta, manteniendo un 60% de la actividad inhibitoria de tripsina residual luego de ser incubado durante 60 min a pHs extremos (pH 2 y pH 12) y un 74,65% luego de 1 hora a 100°C. Ensayos cinéticos permitieron determinar una constante cinética de inhibición (Kᵢ) de 1,7 x10-6 M y una IC50 (concentración de inhibidor que produce 50% de inhibición de tripsina) de 3,9 μg/ml. Otro hallazgo interesante para su potencial uso biomédico fue la evidencia de una fuerte capacidad inhibitoria de la enzima α-1,4-glucosidasa con una IC50 de 75,33 ng/ml, resultado muy prometedor para la potencial aplicación de YBPTI como agente hipoglucemiante natural. Finalmente se evaluó su actividad antifúngica frente a diversas levaduras. Fue posible observar que 5 μg de inhibidor provocaron inhibición del crecimiento de Cándida albicans y Saccharomyces cerevisiae, mientras que no hubo efecto sobre el crecimiento de Cándida tropicalis, Cándida krusei, Cándida glabrata y Rhodotorula spp. Mediante el ensayo de dilución en placa fue posible determinar una Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) de 5,7 μg/ml y una Concentración Fungicida Mínima (CFM) de 17,03 μg/ml, valores que se corresponden con un efecto fungicida del YBPTI sobre C. albicans (CFM/CIM<4). Por microscopía óptica fue posible evidenciar los cambios morfológicos producidos por YBPTI sobre las células de C. albicans así como también se pudo evaluar su efecto sobre la membrana plasmática mediante la adición de SYTOX Green. Este resultado es de especial importancia ya que promueve al inhibidor de tripsina de Capsicum annuum L., como una molécula con el potencial de convertirse en un fármaco natural contra la infección causada por C. albicans, muy eficiente y potente a muy bajas concentraciones. Estos resultados son prometedores para profundizar el estudio del efecto antifúngico de YBPTI y su caracterización molecular, permitiendo el descubrimiento de nuevas moléculas de origen natural con potencial para su empleo en la industria farmacéutica. Se propone continuar estudiando cuál el mecanismo de inhibición de crecimiento sobre Cándidas que ejerce YBPTI.