Participación de apolipoproteína A-I en el perfil anti-inflamatorio en macrófagos THP1

Abstract

En este proyecto de tesina, trabajaremos sobre la hipótesis del rol protectivo que ejerce apolipoproteína A-I (apoA-I), la proteína mayoritaria de las HDL, al remover lípidos celulares y posibilitar el cambio hacia un fenotipo anti-inflamatorio en macrófagos. Los desórdenes en el metabolismo de lipoproteínas constituyen una de las principales causas de enfermedad cardiovascular prematura, siendo la deficiencia de colesterol en HDL, así como los niveles elevados de colesterol en LDL, las anormalidades más frecuentes. La aterogénesis involucra la unión de lipoproteínas plasmáticas, principalmente LDLs oxidadas, en la pared arterial, lo que induce el reclutamiento de macrófagos, que fagocitan progresivamente las LDLox, adoptando el fenotipo espumoso; éstos se acumulan en el endotelio formando la placa ateromatosa inicial y promueven la respuesta inflamatoria. El fenotipo de macrófagos M1 es el tipo pro-inflamatorio; mientras que el fenotipo M2 está involucrado en la resolución de la inflamación. Sin embargo, no hay datos referentes sobre la caracterización fenotípica del estado inflamatorio (M1/M2) como consecuencia de las respuestas que podría causar una proteína típica antiaterogénica como es apoA-I. Así proponemos: Purificar apoA-I WT recombinante expresada en bacterias BL21(DE3). Obtener LDLs de plasma humano por ultracentrifugación en gradiente de densidad de NaBr y posterior cromatografía de exclusión molecular en columna de Sephacryl 300. Obtener LDL oxidadas por tratamiento con sulfato de cobre. Evaluar la polarización hacia un perfil pro/anti inflamatorio en macrófagos en presencia de LDLox y/o de apoA-I WT, mediante citometría de flujo; empleando anticuerpos anti- CD86 para M1 y anti-CD206 para M2, marcados con fluoróforos (AF488 y PE). Para lo cual, monocitos humanos de la línea THP1 serán diferenciados a macrófagos con ésteres de forbol, posteriormente transformados en células espumosas por incubación con LDLox, y finalmente tratados con apoA-I WT. Es probable que la exposición de macrófagos a LDLox determine la aparición del fenotipo M1, y en presencia de apoA-I, del fenotipo M2, lo cual aportará información para caracterizar a los distintos subtipos celulares.