Análisis del efecto antimigratorio de dos extractos de C. sativa en células de coriocarcinoma humano (JEG-3)

Abstract

Introducción. Los fitocannabinoides (cannabidiol (CBD) y el ∆9tetrahidrocannabinol (THC) ejercen diferentes efectos antiproliferativos, proapoptóticos y antimigratorios en tumores, tanto in vivo como in vitro. No obstante, dichos efectos dependen tanto de la concentración como del ratio (relación THC/CBD) de cannabinoides administrados. La línea celular JEG-3 es una cepa de coriocarcinoma humano, caracterizada por una tasa de proliferación e invasividad elevada. Objetivos. Evaluar los efectos citotóxicos, antiproliferativos y antimigratorios de extractos de cannabis con alto contenido en THC (THC-HSC) o CBD (CBD-HCS) en una línea tumoral de coriocarcinoma humano JEG-3. Metodología. Crecimiento celular: Se cultivaron las células JEG-3 en medio DMEM con 10% de SFB, a 37°C y 5% CO2. Ensayo de migración: Las células JEG-3 en cultivo proliferaron hasta alcanzar un estado de confluencia del 80% de la superficie. Luego se retiró el medio de cultivo y se sometieron a tratamientos: control, CBD-HSC 1µM y THC-HSC 1µM. Una hora después se realizó una lesión de 110 ± 10 µm y se evaluó el porcentaje de regeneración del área lesionada a 0 h y 24 h posteriores a la lesión. Finalmente, se repitieron las condiciones del ensayo en células creciendo sobre vidrios silanizados para evaluar por inmunocitoquímica la actividad proliferativa, la supervivencia celular y la capacidad migratoria de las células. Inmunocitoquímica: Se emplearon anticuerpos 1° monoclonales (Sta. Cruz Biotech-USA) anti- Ki 67 (proliferación), anti-Cas-3 (apoptosis) y anti-MMP-9 (migración) a una dilución de 1:50. Las muestras fueron reveladas mediante el sistema ABC (Vector-USA) usando DAB como cromógeno y contraste de hematoxilina. Estadística: Se estableció el grado de significancia estadística mediante GraphPad Prism 8, empleando t-test y ANOVA.