Caracterización enterotoxigénica y estudio de sensibilidad antimicrobiana in vitro de cepas de <i>Escherichia coli</i> aisladas de cerdos con cuadros clínicos de diarrea pre y posdestete

Abstract

Se estudió la capacidad toxigénica y la sensibilidad antimicrobiana, de 29 cepas de Escherichia coli aisladas de lechones con cuadros de diarrea pre y posdestete. Las muestras fueron obtenidas de materia fecal, hisopados rectales, contenido intestinal, bazo y cerebro. Se sembraron en Agar Eosina Azul de Metileno y se incubaron a 37ºC durante 24 horas. La identificación bioquímica y fisiológica consistió en las determinaciones habituales que se siguen para la caracterización de enterobacterias. De todas las muestras procesadas, se aisló E. coli. Se llevó a cabo la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), con el objeto de identificar cepas toxigénicas, para ello se extrajo el ADN, por lisado celular en caliente; se utilizaron "primers" para determinar genes codificantes de las toxinas STIa (toxina termoestable), LTI (toxina termolábil) y verotoxinas VTI y VTII. Se utilizaron cepas controles para determinar la especificidad del producto amplificado. El producto de reacción fue visualizado en gel de agarosa al 1,5%, obteniéndose los siguientes resultados: de las 29 cepas, 6 fueron positivas para STIa y 1 para LTI. No se detectaron genes codificantes para verotoxinas. Las muestras positivas fueron aisladas, en distintos períodos, de una granja con un cuadro clínico de diarrea posdestete con alta morbimortalidad. De todas las cepas aisladas, se determinaron las Concentraciones Inhibitorias Mínimas (CIM) de las siguientes drogas: ampicilina (AMP), gentamicina (GEN), amicacina (AKN), ceftiofur (CTF), enrofloxacina (ENF), danofloxacina (DNF), sulfametoxazol (SMX) y trimetoprimasulfametoxazol (TMS), por el método de dilución en agar, utilizando agar Müeller-Hinton adicionado de diluciones seriadas de base dos de cada antimicrobiano. Los resultados de la CIM, expresados en µg/ml, para el 50% y el 90% de las cepas probadas fueron respectivamente: AMP 16 - 1024, GEN 2 - 64, AKN 4 - 16, CTF 0,25 - 0,5, ENF y DNF 0,12 - 0,5, SMX >1024 - >1024 y TMS 0,5 - > 512. Se observó un alto nivel de resistencia de las cepas estudiadas frente a la AMP, GEN, SMX y TMS.

The enterotoxigenic capacity and the antimicrobial susceptibility of 29 Escherichia coli strains isolated from piglets with pre and post weaning diarrhea were studied. Samples were taken from feces, rectal swabs, intestinal content, spleen and brain. Isolation were carried out on eosin methylene blue agar at 37ºC during 24 hours. Biochemical and physiological identification consisted on commonly used determination for Enterobacteriaceae family characterization. From all processed samples E.coli were isolated. Polymerase chain reaction (PCR) was carried out to identify toxigenic strains. To performed it, DNA was extracted by hot cell lysated. Primers to determine STIa toxin (thermostable toxin) encoded genes, LTI (thermolabil toxin) and verotoxins VTI and VTII were used. Standard control were use to determine the specificity of amplified product. The reaction product was visualized on agarose gel 1.5%. Results were the following: from 29 strains, 6 contained STIa and 1 for LTI. Verotoxin encoded genes could not be detected. All positive samples were isolated in different periods from pig farm with a high mortality post weaning diarrhea and. Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) of the following drugs: ampicillin (AMP), gentamicin (GEN), amikacin (AKN), ceftiofur (CTF), enrofloxacin (ENF), danofloxacin (DNF), sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprimsulfamethoxazole (TMS), were determinated by agar dilution method using Müeller-Hinton agar added with serial two fold dilutions of each drug. The MIC results in µg/ml for 50% and 90% of the strains tested were respectively: AMP 16 - 1024, GEN 2 - 64, AKN 4 - 16, CTF 0.25-0.5, ENF and DNF 0.12-0.5, SMX >1024 - >1024 and TMS 0.5 - >512. High level of resistance against AMP, GEN, SMX and TMS was observed on studied strains.