Construcción de un adenovirus recombinante regulable portador de los genes de pluripotencia y de gen GFP para implementar en rejuvenecimiento celular mediante reprogramación celular parcial

Abstract

La reprogramación celular convencional involucra convertir un linaje celular somático a células madre pluripotentes inducidas (iPSC), las cuales pueden ser posteriormente rediferenciadas a tipos celulares específicos. De manera alternativa, la reprogramación celular parcial convierte células somáticas en otros tipos celulares por expresión transitoria de genes de pluripotencia, procedimiento que genera intermediarios celulares pluripotentes que retienen la identidad celular original, pero que están rejuvenecidos y responden a cócteles apropiados de factores de diferenciación específicos. En este contexto, el rejuvenecimiento por reprogramación celular parcial constituye un campo de investigación emergente. Para su implementación, los sistemas de expresión regulables policistrónicos, generalmente integrativos, son ampliamente utilizados. Con el mismo propósito, hemos construido un adenovirus recombinante (no integrativo) regulable de alta capacidad que contiene el gen de la proteína fluorescente verde (GFP) y los genes oct4, sox2, klf4 y c-myc (OSKM, o genes de pluripotencia). Estos genes OSKM se encuentran ensamblados como un tándem bicistrónico (STEMCCA) bajo el control de un promotor bidireccional regulable por sistema Tet-Off que controla también la expresión de la GFP. Separadamente, un segundo cassette expresa constitutivamente la proteína regulatoria tTA. En este trabajo se describe la generación de dicho adenovector dependiente de virus auxiliar y la caracterización del mismo mediante diversas técnicas. Este adenovector constituye una herramienta promisoria para la implementación de reprogramación parcial no integrativa.