<i>Bacillus</i> and <i>Brevibacillus</i> strains as potential antagonists of <i>Paenibacillus larvae</i> and <i>Ascosphaera apis</i>

Abstract

Species of Bacillus and Brevibacillus associated with honey bees are interesting sources of bioactive compounds with potential uses beyond the field of apiculture. Most Bacillus species and related genera produce a broad range of antimicrobial compounds, with activity against bacteria and fungi that include peptides, lipopeptides, bacteriocins, and bacteriocin-like inhibitory substances. By using biological tools, we evaluated the antagonistic activity of 34 bacterial strains against Paenibacillus larvae and Ascosphaera apis, the causal agents of American Foulbrood and Chalkbrood diseases of honey bee larvae, respectively. Data reveal that the antagonistic response was strain-specific, species-specific, and also medium-dependent. By using molecular tools, we investigated the distribution of antimicrobial peptide genes in the antagonist strains. The presence of homologous sequences to nine genes encoding for the synthesis of the antimicrobial peptides bacillomycin L (bmyB), fengycin (fenD), bacilysin (bacA), subtilin (spaS), iturin A (ituD, lpa-14; ituC), and surfactin (sfp; srfAA) was assayed by PCR. The distribution and frequency of these genes within the bacterial antagonists were also variable and strain-dependent, being the most common surfactins (srfAA¼44% and lpa-14¼38%), iturins (ituD¼47%), and bacilysin (bacA¼32%). Moreover, a positive correlation between presence of antimicrobial peptide genes and antagonism was found taking into account that 85% of the antagonists had at least one of the antimicrobial peptide genes. We also identified those antagonists active against different P. larvae genotypes. To our knowledge, this is the first study of the association between the presence of homologous sequences of antimicrobial peptide genes and antagonism against P. larvae and A. apis strains.

Las especies de Bacillus y Brevibacillus asociadas con abejas melíferas son una fuente interesante de compuestos bioactivos con usos potenciales más allá del campo de la apicultura. La mayoría de las especies de Bacillus producen una amplia gama de compuestos antimicrobianos, con actividad contra bacterias y hongos que incluye péptidos, lipopéptidos, bacteriocinas y sustancias inhibidoras similares a bacteriocinas (BLIS). Con el objeto de buscar alternativas naturales para el control de loque americana y cría yesificada, se emplearon herramientas biológicas para evaluar la actividad antagónica de 34 cepas bacterianas contra cepas de Paenibacillus larvae y de Ascosphaera apis, agentes causales de estas enfermedades. Los resultados obtenidos mostraron que la respuesta antagónica fue medio-dependiente y cepa-dependiente. Se analizó por PCR la presencia de secuencias homólogas a 9 genes relacionados con la síntesis de péptidos antimicrobianos: bacilomicina L (bmyB), fengicina (fenD), bacilicina (bacA), subtilina (spaS), iturina A (ituD, lpa-14; ituC), y surfactina (sfp; srfAA). La distribución y frecuencia de estos genes en las cepas antagonistas tambi en resultó variable y cepa-dependiente, siendo los más comunes surfactinas (srfAA¼44% y lpa-14¼38%), iturina A (ituD¼47%) y bacilicina (bacA¼32%). Se identificaron antagonistas bacterianos frente a distintos genotipos de P. larvae y se encontró una correlación positiva entre la presencia de genes vinculados con la producción de péptidos antimicrobianos y la inhibición del desarrollo de P. larvae. Este trabajo constituye el primer estudio de asociaciones entre presencia de estos genes y el antagonismo frente a P. larvae y A. apis.