Identificación de una levadura con capacidad macerante y caracterización parcial de sus carbohidrasas exocelulares

Abstract

Estudios previos demostraron que una levadura autóctona, aislada de frutas cítricas, produce extractos enzimáticos con capacidad macerante de tejidos vegetales (papa, mandioca). El objetivo del presente estudio fue identificar dicha levadura por métodos moleculares e identificar las actividades enzimáticas posiblemente involucradas en el proceso de maceración. La identificación de la levadura se realizó mediante amplificación de la región entre los genes 18S rRNA y 28S rRNA utilizando los primers ITS1 e ITS4, seguido de digestión con enzimas de restricción (Hinf I, Cfo I y Hae III). El fragmento amplificado, 5.8S-ITS rRNA, fue secuenciado para confirmar su identidad. La levadura fue identificada como Pichia anomala. En sobrenadantes de cultivo se detectaron dos isoenzimas con actividad de poligalacturonasa (PG) de tipo endo; no se detectó actividad de pectinliasa, pectatoliasa, pectinesterasa, celulasa ni xilanasa.

Previous studies have demonstrated that enzymatic extracts from a wild-type yeast isolated from citrus fruit peels display macerating activity of plant tissues (i.e. potato, cassava, etc.). The aim of the present study was to identify the wild-type yeast by molecular methods and characterize the enzymatic activities possibly involved in the maceration process. Molecular identification of the wild-type yeast was performed by amplification of the 18S and 28S rRNA regions using ITS1 and ITS4 primers followed by digestion with restriction enzymes (Hinf I, Cfo I and Hae III). The species assignation was also confirmed by sequence analyses of the 5.8S-ITS rRNA region. The wild-type yeast was identified as Pichia anomala. Two isoenzymes with PG activity were found in culture supernatants, whereas cellulase, xylanase, pectinlyase, pectatelyase and pectinesterase activities were not detected.