Estandarización de técnicas de <i>immunoblotting</i> para el diagnóstico de esquistosomiasis

Abstract

La esquistosomiasis es causada por parásitos del género <i>Schistosoma</i>, siendo <i>S. mansoni</i> el único presente en Venezuela. Las áreas endémicas del país se caracterizan por bajas cargas parasitarias, dificultando el diagnóstico parasitológico. La mayoría de las técnicas inmunológicas requieren de equipos costosos. Las técnicas de <i>Immunoblotting</i> pueden ser una alternativa. Por tal motivo, el objetivo del presente trabajo fue la estandarización de técnicas de <i>Immunoblotting</i> con antígeno soluble de huevo (SEA) de <i>S. mansoni</i>, con el fin de complementar las pruebas diagnósticas para esquistosomiasis. Se realizó la preparación del antígeno soluble de huevo de <i>S. mansoni</i> y se identificaron las condiciones óptimas de reacción para las técnicas <i>Dot blot</i> y <i>Slot blot</i>. Se observó que para ambas técnicas, la cantidad óptima de antígeno fue 0,25 microgramos/dot o slot, la dilución óptima del suero 1/100 y la dilución óptima del conjugado 1/3000, permitiendo diferenciar claramente positivos de negativos, por lo que en estudios posteriores podrían ser validadas para evaluar su uso en diagnóstico clínico y en estudios epidemiológicos.

Schistosomiasis is a parasitic disease caused by parasites of the genus <i>Schistosoma</i>. <i>Schistosoma mansoni</i> is the only species present in Venezuela. Endemic areas of the country are characterized by low parasitic loads making difficult their parasitological diagnosis. Main immunological techniques require expensive equipments and immunoblotting techniques can be an alternative. The objective of this work was standardizating two immunoblotting methods -Dot Blot and Slot blot- with a soluble <i>S. mansoni</i> egg antigen (SEA) in order to provide a tool to complement diagnostic tests for schistosomiasis. The soluble <i>S. mansoni</i> egg antigen was prepared, and optimal reaction conditions for the <i>Dot blot</i> and <i>Slot blot</i> techniques were identified. The optimal amount of antigen was 0.25 micrograms/Dot or Slot, the optimal dilution of the serum was 1/100, and the optimal dilution of the conjugate was 1/3000 for both techniques. They allowed to clearly differentiate positives from negative cases and could be validated in subsequent studies to evaluate their use in clinical diagnosis and epidemiological studies.