Identificación de cultivares de <i>Lotus</i> spp. por análisis de proteínas seminales

Abstract

El método de análisis electroforético de proteínas de reserva de las semillas ha sido aplicado para identificar especies y entradas del género Lotus. Los objetivos de este trabajo fueron validar el método electroforético de fraccionamiento de proteínas, establecer su confiabilidad y demostrar su utilidad para la diferenciación de 5 cultivares de 3 especies de Lotus. Para ello, se ensayaron diferentes tamaños muestrales de semillas y volúmenes de siembra. Se empleó electroforesis vertical en poliacrilamida desnaturalizante. Para cada cultivar se determinó el electroforegrama proteico característico. Se lograron fraccionar 39 bandas proteicas, de las cuales 24 mostraron diferencias en sus movilidades. Las bandas se registraron en una matriz de datos (presencia/ausencia), se realizó el análisis de agrupamiento usando el enlace promedio (1-Jaccard) como medida de disimilitud, representándose los datos a través de un dendrograma. Si bien a partir de 10 mg de semillas molidas y 10 µl de volumen de siembra se halló en cada cultivar un modelo electroforético típico, la cantidad de solución de extracción puede estar en el límite. Por ello resultó adecuada la diferenciación de los cultivares con un tamaño de muestra de 20 mg y 20 µl de volumen de siembra.

Electrophoresis of seed storage proteins has been applied to identify species and accessions of Lotus. The objectives of this work were to validate the electrophoresis method to discriminate total seed proteins, to establish its reliability and to demonstrate its effectiveness for the differentiation of 5 cultivars belonging to 3 species of Lotus. Diverse seed sample sizes and load volumes were essayed. Vertical electrophoresis was carried out at 45 mA/60 mA. Then the gels were treated with a water solution of ethanol/acetic acid /PAGE Blue. A pattern of protein bands for each cultivar was obtained (electrophoregram). The lotus seed storage proteins were electrophoretically separated in 39 bands; 24 of them showed qualitative differences. The protein bands were recorded on a data matrix according to their presence or absence, cluster analysis (1-Jaccard) was carried out and finally a dendrogram was obtained. Though a typical electrophoretic model for each cultivar was found using samples of 10 mg of milled seeds and 10 µl of load volume, the amount of extraction solution may be in the limit. This is the reason why cultivar differentiation using samples whose sizes were 20 mg milled seeds and 20 µl load volume finally resulted the most adequate.