Estudio funcional del gen B-myb de Xenopus laevis

Abstract

B-Myb pertenece a una familia de proteínas capaces de unirse específicamente al ADN, regulando de esta forma la transcripción de genes. A nivel de la estructura de la proteína, los miembros de esta familia poseen dos dominios con homología en la secuencia aminoacídica. De estos dominios, el más característico, está localizado en el extremo amino y consiste en tres elementos de carácter básico repetidos en tándem responsables de la actividad específica de unión al ADN. El otro dominio, hacia el extremo carboxilo, está aparentemente implicado en la regulación negativa de las actividades de las proteínas Myb. La proteína B-Myb está involucrada en procesos de proliferación celular y en la regulación del ciclo celular. Esta proteína ha sido clonada en Xenopus laevis (XB-Myb). El objetivo de esta tesis es la caracterización de los distintos dominios de la proteína B-Myb de Xenopus in vitro e in vivo. XB-myb se transcribe a altos niveles durante la ovogénesis y la embriogénesis de Xenopus. Hibridaciones in situ usando sondas de ARN antisentido de XB-Myb mostraron un patrón de expresión restringido al neuroectodermo. El análisis de dicho patrón por medio de secciones histológicas indicó que los transcriptos de XB-myb se detectan principalmente en células proliferativas. Por medio de experimentos in vitro, se definió un pequeño elemento de secuencia responsable de la regulación negativa de la actividad de unión al ADN a través de la interacción de los extremos amino y carboxilo de la proteína. En ovocitos inmaduros así como en estadíos embrionarios XB-Myb se localiza en el núcleo. Sin embargo, en ovocitos maduros esta proteína tiene distribución citoplásmica. La regulación de la retención en el citoplasma y la subsecuente importación al núcleo de XB-Myb involucran al menos dos elementos de la proteína. El segundo elemento lo constituyen dos señales de localización nuclear, necesarias para la translocación al núcleo eficiente de XB-Myb. Es muy probable que los mecanismos que regulan este transporte se basen en un sistema de enmascaramiento de las señales de localización nuclear.