Estudio del polimorfismo y poligenismo de los <i>loci</i> DRB en caballos criollo argentino

Abstract

El objetivo del trabajo de Tesis Doctoral consistió en estudiar el polimorfismo y el poligenismo de los genes de clase II DRB del Complejo Principal de Histocompatibilidad en Equinos (ELA). La variabilidad genética de las regiones promotoras y de la región de reconocimiento del antígeno (exón 2) se analizó mediante los métodos de PCR-RFLP y PCR-SSCP. Se detectaron tres nuevos alelos del exón 2 definidos por PCR-RFLP, los que se confirmaron por clonado y secuenciación de los productos de amplificación. Además, el número de variantes detectadas en cada animal permitió inferir la presencia de al menos tres copias de genes DRB en los haplotipos equinos analizados. Estos datos se confirmaron a través de análisis filogenético y de segregación. El clonado y secuenciación de la región reguladora (URR) de los genes DRB permitió caracterizar la organización del promotor proximal. Los resultados obtenidos mostraron la presencia en dirección 5´ - 3´ de las cajas conservadas W, X, Y, CCAAT y TATA. Esta estructura es semejante a la reportada en los genes ortólogos de otras especies de mamíferos y evidenciaría que la región analizada corresponde a un gen DRB funcional. Por otra parte, el análisis del polimorfismo del promotor permitió identificar cinco alelos definidos por SSCP. El conjunto de resultados obtenidos mostró que los genes ELA-DRB presentan las principales características descriptas para los genes de Clase II de mamíferos: existencia de copias múltiples, alto grado de polimorfismo, alta tasa de sustituciones no sinónimas en los sitios de reconocimiento del antígeno, y conservación de secuencia y estructura del promotor proximal.