Viabilidad de espermatozoides epididimales caninos y felinos almacenados bajo diferentes condiciones

Abstract

El objetivo general de esta tesis fue estudiar la sobrevida de EE caninos y felinos almacenados en EPI modificando las condiciones y el tiempo de almacenado transcurrido hasta la recuperación de las gametas para aumentar el número de espermatozoides viables. Los objetivos específicos fueron: 1) comparar el efecto de diferentes medios sobre la supervivencia de EE almacenados a 4ºC durante distintos periodos dentro del EPI; 2) evaluar el efecto de diferentes medios sobre la temperatura alcanzada en el interior del EPI a 4ºC; 3) evaluar los cambios autolíticos de las células epididimales durante el almacenamiento del órgano a 4ºC por diferentes períodos mediante microscopía óptica y MET; 4) estudiar el efecto de dos DIL para criopreservación sobre la supervivencia de EE al descongelado. Se desarrollaron 4 experimentos. En el primer experimento se usaron 140 epidídimos almacenados en SF y TYH de 0 a 72 h. Se obtuvieron diferencias significativas en todas las variables de calidad espermática estudiadas en función del tiempo de almacenado en ambas especies. El medio de almacenado influyó en el porcentaje de EE viables recuperados en felinos pero no en los caninos. En el segundo experimento se almacenaron los epidídimos en los 2 medios de transporte a 4°C y se registraron las temperaturas alcanzadas dentro de 20 colas de epidídimos, cada 30 minutos a través de la colocación de termocuplas. Al comparar la curva de descenso de temperatura de las dos especies se observaron diferencias significativas. La comparación de las curvas de descenso de temperatura entre medios mostró una tendencia a ser significativamente diferente en los felinos. En el tercer experimento se realizaron 44 cortes semifinos y 44 ultrafinos de colas epididimales, almacenadas a 4°C en dos medios durante 24, 48 y 72 h para microscopia óptica y MET. Los estudios histológicos en felinos, mostraron cambios autolíticos con el tiempo y con el medio. Los cambios autolíticos fueron mayores en SF que en TYH. En el estudio ultraestructural la cromatina nuclear y la morfología de las estereocilias cambiaron con el tiempo y con el medio de almacenado como en el estudio morfológico. El NN y el AN cambiaron con el tiempo. En caninos, los cambios histológicos y ultraestructurales aumentaron con el tiempo de almacenado pero no hubo diferencias entre los medios El NM cambió con el tiempo. En el cuarto experimento se estudió el efecto del agregado de 0,25% de SDS (TRIS SDS 0,25%) al diluyente TRISBA sobre la congelabilidad de EE caninos congelados-descongelados. Se utilizaron 30 epididimos caninos y se evaluó la calidad espermática en semen fresco y al descongelado. Todas las variables de calidad seminal estudiadas fueron mejores en el semen congelado-descongelado con TRIS SDS 0,25% con excepción de HOS y el porcentaje de AI. En conclusión, el TYH permite obtener mayor cantidad de EE en felinos y la adición de SDS al DIL mejora la calidad de los EE congelados-descongelados.