Caracterización proteica y funcional de microrovesículas liberadas por eritrocitos tratados con alfa hemolisina de E.coli

Abstract

Alfa hemolisina (HlyA) pertenece a una familia de toxinas denominadas RTX (Repeat in toxins), y es uno de los factor de virulencia de las cepas uropatogénicas de E.coli. HlyA, al igual que muchas de las toxinas de esta familia, debe ser acilada en dos residuos internos de Lys en el interior de la bacteria antes de ser secretada al medio. Esta modificación postraduccional hace que la toxina pase de la forma inactiva (ProHlyA), sin acilar, a una proteína activa acilada (HlyA). En los últimos años hemos estudiados los efectos que produce esta toxina a los eritrocitos a concentraciones sublíticas. Hemos encontrado que induce un aumento bifásico de calcio, que produce la activación de calpaínas que degradan proteínas del citoesqueleto; siendo responsables de los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos previos a la lisis. Además, HlyA activa esfingomielinasas endógenas, produciendo un aumento de ceramida en la membrana, hecho que cambia las propiedades físicas de la membrana. Por otro lado, estudios más detallados de los cambios morfológicos observados, demostraron que estos cambios son independientes del ingreso de calcio y que HlyA sufre un proceso de transformación de discocito a esferocito. Todos los eventos anteriormente descriptos ocurren en aquellas células que secretan microvesículas al medio como un proceso de remodelación de la membrana. Por otro lado se ha visto que estas microvesículas participan en proceso de intercomunicación celular. or lo anteriormente mencionado es que recientemente hemos logrado purificar microvesículas secretadas por eritrocitos tratados con HlyA y es el objetivo del presente trabajo caracterizar la composición proteica de estas microvesiculas y determinar si la liberación de microvesículas puede actuar como una forma de diseminación de la toxina.