Complete genome amplification of Equine influenza virus subtype 2

Abstract

This work reports a method for rapid amplification of the complete genome of equine influenza virus subtype 2 (H3N8). A ThermoScriptTM reverse transcriptase instead of the avian myeloblastosis virus reverse transcriptase or Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase was used. This enzyme has demonstrated higher thermal stability and is described as suitable to make long cDNA with a complex secondary structure. The product obtained by this method can be cloned, used in later sequencing reactions or nested-PCR with the purpose of achieving a rapid diagnosis and characterization of the equine influenza virus type A. This detection assay might be a valuable tool for diagnosis and screening of field samples as well as for conducting molecular studies.

En este trabajo comunicamos un método rápido que permite la amplificación del genoma completo del subtipo 2 (H3N8) del virus de la influenza equina. Se utilizó la enzima transcriptasa reversa ThermoScriptTM en lugar de la transcriptasa reversa del virus de la mieloblastosis aviar o la transcriptasa reversa del virus de la leucemia murina de Moloney. Esta enzima ha demostrado tener una alta estabilidad térmica y la capacidad de hacer largas copias de ADN con una estructura secundaria compleja. El producto obtenido por esta técnica puede ser clonado y utilizado posteriormente en reacciones de secuenciación o de PCR anidada con la finalidad de lograr un diagnóstico rápido y la caracterización del virus de la influenza equina tipo A. Este ensayo de detección puede llegar a ser una valiosa herramienta para el diagnóstico y el análisis de muestras de campo, así como para la realización de estudios moleculares.