Estudio in vitro del efecto clastogénico del fenoterol y la teofilina en linfocitos humanos

Abstract

La maduración in vitro de oocitos es un paso crítico en la producción in vitro de embriones, razón por la que se han buscado nuevos protocolos que permitan optimizar este proceso. La teofilina y el fenoterol en oocitos desencadena una serie de procesos fundamentales para la óptima maduración citoplasmática y nuclear de los oocitos, además de ser un medicamento usado en humanos como broncodilatador, estimulante del miocardio y del sistema nervioso central. Ambos medicamentos se han perfilado como reemplazo de las gonadotropinas FSH y LH por su menor costo. El fenoterol es una droga usada para el tratamiento del asma y es un eficiente antioxidante. Sin embargo, algunos autores han reportado efectos genotóxicos y mutagénicos de la teofilina, lo cual puede perturbar cualquier proceso celular por su capacidad de afectar la expresión génica y los productos génicos. Lo anterior podría resultar contraproducente en la optimización de un protocolo de maduración in vitro de oocitos. Por otro lado, no se conocen reportes sobre el potencial daño genético que pueda causar el fenoterol. Por esa razón, en este estudio se evaluó el efecto citotóxico por la técnica de exclusión del colorante vital azul de tripano de la teofilina y la integridad genómica por ensayo cometa en linfocitos de sangre periférica humana, tratados con teofilina (0,02, 0,2 y 2 mM) o fenoterol (0,1, 1 y 10 mM). En el presente trabajo no se encontró efecto citotóxico ni clastogénico en linfocitos de sangre periférica a las concentraciones de teofilina evaluadas. No se encontró efecto clastogénico a las concentraciones de 0.1 y 1 mM utilizadas en los protocolos de maduracion in vitro de oocitos, pero se encontró un fuerte efecto clastogénico a la concentración de 10 mM.

In vitro maturation of oocytes is a critical step in the in vitro embryo production and for this reason new protocols to optimize that process has been developed. Theophylline and fenoterol in oocyes trigger fundamental process in nuclear and citoplasmatic maturation of oocytes. Both substances are mainly used in humans as broncodilators in obstructive airway diseases, such as bronchial asthma, and for myocardial and nervous central sistem stimulation. Both medicines has been proposed for substitution of gonadotrophins FSH and LH because their comparable action and low cost. Not obstant, some researchers have found genotoxic and mutagenic effects of theophylline, that can damage any cellular process by its capacity to affect the genic expression and their products, which could be result counterproductive in the in vitro maturation of oocytes protocol optimization. On the other hand, no reports have been found on the genotoxicity and mutagenicity of fenoterol; for this reason, the citotoxicity by tripan blue exclution of theophylline and the genomic integrity by comet assay of theophylline (0.02, 0.2 y 2 mM) and fenoterol (0.1, 1 y 10 mM) has been assessed in this study. We have not found citotoxic and genotoxic effects of theophylline in periphery human limphocytes. No clastogenic effects at the concentration 0.1 and 1 mM used in the in vitro maturation of oocytes were noted, but strong clastogenic effect at 10 mM was found.