Enzimas proteolíticas presentes en el látex de Ficus punlila L. (Moraceae)

Abstract

Se detectó la presencia de actividad proteolítica en frutos de Ficus pumila L. (Ficus repens Hort.). El extracto crudo fue obtenido por clarificación del látex centrifugado a 16.000 x g durante 30 mn y ultracentifugando luego el sobrenadante a 100.000 x g durante una hora. La preparación enzimática cruda mostró elevada actividad proteolítica sobre caseína en presencia de cisteína 12 mM, pero la actividad fue inhibida por inhibidores tiol-específicos tales como HgCl2 y E-64, sugiriendo que las proteasas pertenecen a la familia de las peptidasas cisteínicas. El extracto crudo mostró un rango de pH óptimo en la zona alcalina (pH 7,0-9,0) y una notable estabilidad térmica. La purificación fue llevada a cabo por un simple procedimiento que incluye ultracentrifugación, precipitación acetónica y cromatografía de intercambio iónico. La principal fracción proteolítica ha sido parcialmente caracterizada: su pH óptimo es igual al de la preparación cruda, es termoestable, su Mr (SDS-PAGE) es de 28,6 kDa y tiene un pI mayor que 9.3.

The presence of proteolytic activity was detected in fruits of Ficus pumila L. (Ficus repens Hort.). The crude extract was obtained by clarification of the latex through centrifugation at 16,000 x g for 30 min. Subsequently the supernatant was ultracentrifuged at 100,000 x g for one hour. The crude enzyme preparation showed high proteolytic activity on casein in the presence of 12 mM cysteine, but the activity was inhibited by thiol-specific inhibitors like HgCl2 and E-64, suggesting the proteases belong to the cysteine family. This crude enzyme extract showed maximum caseinolytic activity within an alkaline range of pH (7.0-9.0) and a remarkable thermal stability. The purification was carried out by a simple procedure involving ultracentrifugation, acetone precipitation and cationic exchange chromatography. The main fraction obtained was partially characterized: its optimum pH range is 7.0-9.0, is very stable at high temperatures, showed a Mr = 28.6 kDa (SDS-PAGE) and an isoelectric point higher than 9.3.