Aislamiento y caracterización parcial de una lipasa presente en raíces primarias de Gossypium hirsutum L. cv. Guazuncho 2 (Malvaceae)

Abstract

Los extractos crudos de raíces de plántulas de algodón (Gossypium husutum L. cv. Guazuncho 2) de 1-2 días de crecimiento manifiestan actividad lipolítica cuando se utiliza aceite de algodón como sustrato. La actividad lipolítica está asociada al pellet obtenido por centrifugación del extracto crudo a 11.000 g a 4ºC durante 30 minutos. La lipasa fue solubilizada a partir del pellet mediante tratamiento con Tritón X-100 1% (v/v) en buffer Tris-HCI 20 mM de pH 8,5 conteniendo DTT 1 mM y EDTA 0,5 mM. Luego de dos centrifugaciones sucesivas a 50.000 g durante 30 minutos y a 100.000 g durante 1 hora la enzima se recupera en el sobrenadante de la última centrifugación. La lipasa manifiesta máxima actividad en un rango de pH entre 8,0 y 8,5 y a temperaturas comprendidas entre 55ºC y 60 ºC, siendo estimulada por la presencia de ion calcio. El análisis por HPLC de los triacilglicéridos (TAG) residuales de aceite de algodón luego de la acción de la lipasa revela una mayor afinidad de la misma hacia TAG que contienen ácido oleico. El fraccionamiento por cromatografia de exclusión molecular (Sephacryl S-300) muestra la presencia de dos fracciones con actividad lipolítica.

Crude extracts of cotton seedling roots (Gossypium hirsutum L. cv. Guazuncho 2) exhibit lipolytic activity on cotton seed oil. When the crude extract is centrifuged for 30 min at 4ºC and 11.000 g lipolitic activity is recovered from the pellet by adding 20 mM Tris-HC1 buffer (pH 8.5) containing 1% Triton X-100, 1 mM DTT and 0,5 mM EDTA. After centrifugation for 30 min at 50.000 g and for 1 h at 100.000 g the enzyme is recovered in the supernatant. The lipase shows maximum activity at pH 8.0-8.5 and at 55ºC - 65ºC and is stimulated by calcium. HPLC analysis of the remanent triacylglycerols (TAG) after the action of the lipase on cotton seed oil reveals higher affinity for TAG containing oleic acid. Fractionation of the soluble enzyme preparation by gel chromatography (Sephacryl S300) reveals the presence of two active fractions.