Desarrollo y estandarización de un ELISA indirecto para la detección de anticuerpos contra el Herpesvirus bovino tipo 1

Abstract

An indirect enzyme linked immunosorbent assay (I-ELISA) was developed to detect antibodies to BHV-1 in serum samples. Nonidet P40-solubilized infected with BHV-I reference strain and mock-infected cell lysates were used as antigens. Serum samples were diluted 1: 64 and a commercial horse radish peroxidase-labelled rabbit anti-bovine lgG was used as second antibody. The reaction was developed using azino-dietilbenzotiazol-sulfonate (ABTS). Cut-off was determined by ratio sample (Rs). Virus neutralization (VN) test was used as a reference test over the 587 samples, 416 of them were positive by VN and 1-EL1SA, 145 were negative by both techniques, and 26 were positive by 1-EL1SA and negative by VN. Using VN as standard, the ELISA showed a relative specificity and sensibility of 100 and 84.79%, respectively.

Se desarrolló un ELISA indirecto para el diagnóstico de VHB-1, utilizando un antígeno soluble elaborado con una cepa viral de referencia. Los sueros se emplearon en la dilución 1:64 y como segundo anticuerpo se utilizó un suero comercial anti IgG bovina conjugado con peroxidasa. La reacción fue revelada con Azino-dietilbenzotiazol-sulfonato (ABTS) y agua oxigenada. Se determinó el punto de corte de acuerdo al cociente entre las densidades ópticas de las muestras problema (Cm) y los sueros de referencia. Los resultados fueron comparados con los obtenidos por Virus Neutralización (VN). Se analizaron 587 muestras de suero bovino tomadas al azar, de las cuales 416 resultaron positivas por ELISA y VN, 145 negativas por ambas técnicas y 26 positivas por ELISA y negativas por VN. La sensibilidad y especificidad fue de 100 y 84,79% respectivamente.