¿Cómo generar un modelo tridimensional <i>in vitro</i> a partir de un adenocarcinoma mamario murino?

Abstract

Las mamosferas son un modelo esferoide tumoral multicelular. Estas son utilizadas como un sistema de cultivo que se asemeja a la tridimensionalidad de los tumores. En este trabajo, hemos desarrollado este modelo utilizando un adenocarcinoma mamario murino con el fin de poder estudiar la fisiología tumoral y posibles aplicaciones terapéuticas. Se han probado diversas técnicas descriptas en trabajos previos. La mejor condición fue usar placas multiwells-96 en forma de V con la adición de una monocapa de agarosa, ya que se generaron esferas compactas y robustas. Además, hemos realizado tinciones histológicas de las mamosferas con hematoxilina-eosina para la observación de su estructura mediante microscopia óptica, y técnicas de inmunohistoquímica para evaluar el índice de proliferación celular y de neovascularización, con bromodeoxiuridina y VEGF (factor de crecimiento de endotelio vascular), respectivamente. Además, hemos estudiado la formación de estas mamosferas utilizando células tumorales y células madre mesenquimales derivadas de cordones umbilicales humanos para evaluar su interacción.

The mammospheres are a multicellular tumor spheroid model. These are a widely used culture system to mimic the three-dimensionality of tumors. In this study, we develop this model using a murine mammary adenocarcinoma, which is used to study tumor physiology and therapeutic applications. We assay some variants of liquid overlay technique to know the best technique to generate this mammospheres. The best condition was used V-shaped 96-wells plates with an agarose monolayer because we were obtained compact and robust spheroids. Additionally, for evaluate spheroid´s structure by optical microscopy, we performed histologic staining of the mammospheres with hematoxylin-eosin. Moreover, we made immunohistochemistry staining to evaluate cell proliferation index and neovascularization, with bromodeoxyuridine and VEGF (vascular endothelial growth factor), respectively. On the other hand, we studied the interaction between tumoral cells and mesenchymal stem cells derived to human umbilical cord.