Aspectos toxicocinéticos de la intoxicación con Heterophyllaea pustulata y su efecto sobre la proliferación y muerte celular en la epidermis de cabras

Abstract

Heterophyllaea pustulata Hook f. (Rubiaceae) es una planta fotosensibilizante que produce pérdidas en el Noroeste Argentino. Su efecto tóxico ha sido demostrado en ratones y se identificaron nueve antraquinonas (AQs) con actividad fotodinámica. El presente trabajo de tesis pretendió establecer una correlación toxicocinética entre las principales AQs (rubiadina y soranjidiol), las lesiones histopatológicas y los patrones de proliferación y muerte celular en la epidermis de cabras intoxicadas experimentalmente. Se emplearon 10 cabras adultas que fueron divididas en dos grupos, uno control (GC) y otro tratado (GT). Los animales del GT recibieron hojas y tallos finos secos y molidos de H. pustulata a la dosis de 5 g/kg de peso. El GC, por su parte, recibió una dosis similar de heno de alfalfa molido. Se evaluó el perfil hepático, el daño dérmico, la concentración sérica y dérmica de las dos AQs en ambos grupos. Las muestras de piel y sangre se obtuvieron a diferentes tiempos durante 15 días de iniciado el experimento. Los tejidos fueron procesados por las técnicas histológicas de rutina. La detección de rubiadina y soranjidiol en muestras desuero tejido dérmico y material vegetal se determinó por cromatografía Líquida de Alta Resolución y acoplada a un espectrómetro de masas. Los patrones de proliferación celular se evaluaron mediante inmunohistoquímica con anticuerpos anti-PCNA, BAX2 y BCL2 para identificar células en mitosis y apoptosis respectivamente. Todos los animales del GT expresaron signos clínicos entre las 8-10 h post administración de la planta. Los signos fueron los característicos de un cuadro de fotosensibilización. En cuanto al perfil hepática solo la glutamato-oxalacetato transaminasa (GOT), la bilirrubina directa (BD) y bilirrubina total (BT)) arrojaron modificaciones durante los primeros 5 días. En concordancia, las AQs (soranjidiol y rubiadina) fueron detectadas en suero de todos los animales del GT a partir de las 8 h post administración, siendo sus niveles máximos entre las 24 y hasta las 72 h para luego descender. En piel no se observaron niveles detectables de ninguna de las AQs bajo estudio. En los estudios histopatológicos, inicialmente, se observaron cambios degenerativos, edema e inflamación. El día 8, la necrosis epidérmica fue intensa y comenzaron los fenómenos de reparación, que incluyeron la proliferación vascular y conjuntiva con hiperplasia epidérmica. La expresión de los antígenos BCL2 y BAX fue máxima entre las 32 y 72 h, mientras que el PCNA aumentó su expresión entre los 8 y 15 días. Los resultados de este trabajo demuestran que fotosensibilización puede considerarse como una forma acelerada de daño directo de la piel y que rubiadina y soranjidiol son determinantes en la toxicidad de H. pustulata.