Implementación de un medio de cultivo líquido para el diagnóstico de paratuberculosis bovina

Abstract

La paratuberculosis bovina es una enfermedad inflamatoria intestinal crónica producida por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, un bacilo acido – alcohol resistente que está relacionado con ciertas enfermedades en el humano. El diagnóstico es la llave para el manejo sanitario y la técnica diagnóstica de oro de esta enfermedad es el cultivo bacteriológico. El medio de cultivo más utilizado es el de Herrold con micobactina (HEYM), un medio sólido con el que se tarda entre 2 y 4 meses para dar un resultado concreto y tiene una baja sensibilidad, cercana al 50%. A pesar de que con los medios líquidos se obtienen mejores resultados, para el diagnóstico de paratuberculosis los que existen son kits comerciales importados y de alto costo. Se implementó un medio de cultivo líquido no comercial, con Middlebrook 7H9 y yema de huevo. Se lo comparó con el HEYM y se demostró mediante la prueba de modelos latentes bayesianos una mayor sensibilidad del medio líquido (94%) sin ir en detrimento de la especificidad (92%), con un área bajo la curva de 0,93 en contraste con el área bajo la curva del HEYM, de 0,84. También se demostró una disminución significativa en el tiempo de incubación requerido para obtener un resultado positivo (p=7,14-12) con este medio, promediando en 19 días para el líquido y 64 para el HEYM (animales clínicos). Además, se reemplazaron los ingredientes importados, incluyendo la micobactina, logrando reducir el costo de producción de un litro de medio en más de $7000 (129,69USD/107 Kg carne pv ). La micobactina se extrajo a partir de Mycobacterium avium subsp avium cepa D4ER, utilizando el método de Snow y se demostró que la actividad biológica del extracto recuperado (micobactina nacional, MN) es equiparable a la micobactina J®, con una eficiencia similar y un costo de producción de 33$ (0,57USD/0,5 Kg carne pv) /mg de MN producido.