ELISA indirecto para el diagnostico rápido de Influenza Equina

Abstract

Se desarrolló un ELISA indirecto para el dia~nóstico de Influenza Equina y se estudió comparativamente con la inhibición de la hemoagluti:-ación. Se elaboró un antígeno a partir de líquido alantoideo infectado sobre el que se realizó una precipitación con polietilenglicol 6000. Los sueros fueron diluidos 1/20. Como segundo anticuerpo se utilizó una antigamaglobulina equina conjugada con peroxidasa. La reacción se reveló con ai. ino-dietilbenzotiazol-sulfonato (ABTS). El punto de corte se estableció según el cociente (Cm) entre la diferencia de absorbancia de la muestra problema y la absorbancia promedio de la muestra control negativo, y la diferencia entre los promedios de las absorbancia de las muestras débil positivas y la absorbancia promedio de la muestra control negativo. Para el análisis de los resultados se utilizó el software S.A.S.® y se utilizó el estudio del chi cuadrado. La inhibición de la hemoaglutinación fue desarrollada de acuerdo al método convencional. De 391 sueros analizados, 75 y 301 resultaron negativos y positivos, respectivamente, por ambas técnicas y 15 negativos por inhibición de la hemoaglutinación fueron positivos por ELISA indirecto. La sensibilidad respecto de la inhibición de la hemoaglutinación fue del 190 % y la especificidad del 83,3 %. La técnica desarrollada constituye una herramienta útil para ser~ utilizada como prueba tamiz en el análisis de numerosas muestras para la determinación de anticuerpos contra Influenza equina.

An indirect enzyme linked immunosorbent assay was developed. Infectad and non infectad allantoic fluids precipitated with polyetilenglycol 6000 were used as antigen and control antigon, respectively. Serum samples were diluted 1/20 and a commercial horse radish peroxidase-labelled rabbit anti-equina lgG was used as second antibody. The reaction was developed using azi no-diethylbenzotyazol-sulfonate (ABTS). Cut-off was determinad by ratio sample (Rs). The hemagglutination inhit,ition test was used as a reference test for the 391 samples analyzed. Of these, 301 sera were positiva by hemagglutination inhibition test and indirect ELISA, 75 were negativa by both techniques, and 15 were positiva by indirect ELISA and negativa by hemagglutination inhibition test. Using hemagglutination inhibition test as standard, the indirect ELISA showed a rela tiva specificity and sensitivity of 83.3 and 100 %, respectively. This indirect ELISA is useful as screening test.