Rapid diagnosis of pseudorabies virus infection in swine tissues using the polymerase chain reaction (PCR)

Abstract

In Argentina pseudorabies is an endemic disease. Routine diagnosis is made by virus isolation. It is a very long procedure to carry out and gives variable results depending on the quality of sample, hence the need for effective techniques, which are rapid and not dependent on the isolation of infectious virus. The polymerase chain reaction (PCR) technique has provided a sensitive, specific and rapid mean to detect DNA sequences. This study describes a PCR method for detection of pseudorabies virus sequences in swine tissues. In order to determine the presence of suid herpesvirus-1 DNA and antigens, 36 tissue samples collected from 19 dead pigs, with signs of pseudorabies infection, were examined by PCR, virus isolation and indirect immunofluorescence, respectively. Fifteen out of 19 pigs were positive at least for one tissue by PCR (15/19) while only three pseudorabies virus strains were isolated (3/19). All the amplified products were identified by digestion with Sa/l and hybridization. The method described herein circumvents tedious viral isolation and DNA purification and would be a valuable tool for rapid diagnosis, since it would take less than 5 h to reach an accurate result even in poorly preserved tissue samples.

La pseudorrabia (enfermedad de Aujeszky) es endémica en la Argentina. El diagnóstico de rutina se realiza por aislamiento del virus, procedimiento lento y de resultados variables que dependen de la calidad de la muestra, por lo que es necesario una técnica efectiva y rápida como alternativa. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite detectar secuencias de ADN de forma rápida, específica y sensible. En este trabajo se describe un método de PCR para detectar secuencias de ADN del virus de la pseudorrabia a partir de tejidos. Se analizaron 36 órganos provenientes de 19 animales con sintomatología compatible con la enfermedad de Aujeszky, por PCR, aislamiento viral e inmunofluorescencia indirecta. Quince del total de casos analizados resultaron positivos por PCR, al menos para un tejido (15/19) mientras que, sólo tres cepas virales fueron aisladas (3/19). Todos los productos obtenidos resultaron específicos ya que fueron digeridos con Sa/I y reaccionaron frente a una sonda biotinilada. Consideramos que la técnica descripta es de mucha utilidad en el diagnóstico de enfermedad de Aujeszky, dado que no requiere purificar el ADN y permite obtener resultados en muestras aún no aptas para el aislamiento viral y en menos de 5 horas.