Desarrollo de dos enzimoinmunoensayos competitivos para la detección de trazas de soja y de huevo en pastas secas

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue desarrollar dos enzimoinmunoensayos competitivos, uno para detectar presencia de trazas de soja y otro para detectar trazas de huevo en pastas secas. Se trabajó con dos antisueros policlonales de conejo específicos de proteínas de soja (PS) y de proteínas de huevo (PH) como anticuerpos primarios. Para cada enzimoinmunoensayo se determinó la concentración óptima de antígeno a inmovilizar en la placa y la concentración de anticuerpo primario para ser utilizada en la competencia. Se ajustó la curva de calibración utilizando concentraciones crecientes de un extracto de producto de soja o de huevo entero en polvo extraído con buffer Tris-HCL 0,0625M con 3% de SDS y 2% de mercaptoetanol. El rango de trabajo utilizado en el enzimoinmunoensayo para detectar soja fue 15-420ppm PS y para huevo fue 20-630ppm PH con una adecuada linealidad (R2: 0,9880 para soja y 0,9564 para huevo). Todos los parámetros de validación estudiados resultaron adecuados. Se analizaron muestras comerciales de pastas secas con estos enzimoinmunoensayos y con kits comerciales de ELISA. Si bien se observaron diferencias importantes en los resultados cuantitativos obtenidos con ambas metodologías, los enzimoinmunoensayos desarrollados se podrían utilizar como métodos de screening.

The aim of this work was to develop two competitive enzyme immunoassays, one to detect the presence of traces of soy and another to detect traces of egg in dry pasta. Two specific rabbit polyclonal antisera raised against soy protein (SP) and egg proteins (EP) were used as primary antibodies. The optimal antigen concentration to be immobilized on the plate and the concentration of primary antibody to be used in competition was determined, for each enzyme immunoassay. The calibration curve was fitted using increasing concentrations of an extract of soy product or whole egg powder. The soy product and the whole egg powder were extracted with Tris-HCl buffer 0,0625M with 3% SDS and 2% mercaptoethanol. The working range used in the enzyme immunoassay to detect soybean was 15-420ppm SP and to detect egg was 20-630ppm EP with adequate linearity (R2: 0.9880 and 0.9564 for soy and egg). All validation parameters studied were appropiate. Commercial samples of dry pasta were analyzed with these enzyme immunoassays and with commercial ELISA kits. Significant differences were observed in the quantitative results obtained with both methods; nevertheless, the developed enzyme immunoassays could be used as screening methods.