Mantenimiento <i>in vitro</i> de ejemplares adultos de <i>Dioctophyma renale</i>

Abstract

Las investigaciones referidas a pruebas de drogas antihelmínticas, producción de antígenos funcionales, elaboración de inmunógenos, entre otras, requieren realizar ensayos con vermes vivos. La posibilidad de mantenerlos viables en cultivo brindaría beneficios en estas investigaciones y permitiría en ocasiones reducir el número de animales de laboratorio utilizados en las experiencias (Nacional Research Council, National Academy Press, Washington DC, 2010 y/o directiva de la Unión Europea 2010), y ofrecería alternativas a las pruebas in vivo. El objetivo era mantener viables, in vitro, a ejemplares adultos de Dioctophyma renale (Dr). Se utilizaron vermes adultos hembras de Dioctophyma renale obtenidos de caninos naturalmente infectados. Los animales fueron diagnosticados mediante análisis del sedimento urinario y posteriormente por métodos ecográficos. Se realizaron las nefrectomías y se obtuvieron los parásitos adultos. Estos se separaron cuidadosamente de la cápsula renal, fueron lavados con buffer fosfato a pH 7,4 (PBS) sobre una placa de Petri y se colocaron en medio de cultivo, RPMI Medium 1640, adicionado de bicarbonato de sodio, glucosa, penicilina, estreptomicina y anfotericina. El medio de cultivo con los vermes se mantuvo en estufa de cultivo a una temperatura constante de 37 °C. Se realizaron observaciones macroscópicas periódicamente cada 6 horas. Para otorgar la condición de viables se tuvo en cuenta únicamente la movilidad, observada detenidamente a ojo desnudo.