Estudio de la participación de dos factores de transcripción WRKY de tomate en la defensa contra Pseudomonas syringae

Abstract

Utilizando datos previos disponibles de RNA-seq, identificamos dos genes WRKY de tomate cuya expresión se induce durante la respuesta inmune temprana PTI y la ETI asociada a Pto/Prf. Nuestra caracterización del silenciamiento de los genes ortólogos en N. benthamiana indicó que contribuyen a la ETI activada por elicitores de diversos patógenos, incluidas bacterias, virus, oomicetes y nematodos. La tecnología CRISPR-Cas9 nos permitió generar tres líneas de tomate knock out para los SlWRKYs de interés. Utilizando estas líneas, pudimos determinar que, tanto SlWRKY22 como SlWRKY25, son reguladores positivos de las respuestas PTI y ETI en tomate. Además, participan en la activación de defensas apoplásica y mediada por estomas, en este último caso regulando el cierre de los mismos. Ambos FT están localizados en el núcleo pero, en nuestras condiciones, no parecen interactuar físicamente. Los experimentos revelaron un mecanismo de acción mediante el cual SlWRKY22 regula la expresión del gen SlWRKY25 y que permite explicar la falta de redundancia funcional observada entre estos dos FT en la inmunidad del tomate. Finalmente, realizando un análisis de co-regulación y ensayos histoquímicos para GUS se encontró a NRG1 como un gen candidato a ser regulado por SlWRKY22 y SlWRKY25.