La separación de funciones de investigación/acusación y juzgamiento ha sido definida como el elemento característico de los sistemas de enjuiciamiento acusatorios. Pero, ¿ello se encuentra reconocido dentro del plexo normativo interamericano de Derechos Humanos? ¿La Corte Interamericana se ha expedido sobre ello? En esta investigación se busca deslindar esa duda a partir del estudio doctrinario de esta separación de funciones, en torno a la garantía de imparcialidad (de forma principal) y a otras garantías que inciden de forma conexa para que se cumpla la mentada separación. Además, se analizan los instrumentos normativos y se recorre la jurisprudencia de la Corte Interamericana para confirmar si la separación de funciones puede ser reconocida como una garantía del Sistema Interamericano de Derechos Humanos.