Silenciamiento del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mediante RNA de interferencia en el miocardio de rata

Abstract

El objetivo de este trabajo es inhibir de forma específica el EGFR en el corazón de rata usando una metodología que permita evitar los efectos colaterales no deseados de las intervenciones farmacológicas.Para ello se planeó desarrollar la técnica del RNA de interferencia para silenciar de manera precisa la expresión de la isoforma 1 del receptor (EGFR, ErbB1) sin afectar los otros miembros de esta familia presentes en el corazón (ErbB2, ErbB4). Para ello se realizaron los siguientes pasos: 1) Buscar la secuencia de EGFR para confeccionar el short hairpin RNA contra el EGFR (shRNA-EGFR) y diseñarlo con todos los elementos necesarios para su funcionamiento intracelular. 2) Clonar el shRNA-EGFR dentro de un plásmido vector lentiviral. 3) Confirmar la secuencia clonada en el vector a través de PCR, cortes con enzimas de restricción y secuenciación. 4) Confirmar funcionalidad del shRNA-EGFR en células HEK293T.