Cultivo de callos <i>in vitro</i> a partir de las hojas de <i>Jodina rhombifolia</i> Hook. & Arn. (Reissek) para obtención de C-glicosilflavonas

Abstract

La especie Jodina rhombifolia Hook et Arn. (Reissek), popularmente conocida como “Sombra de Toro”, es un árbol de hasta 8 -10 m de altura con propiedades medicinales, el cual crece exclusivamente en América del Sur. Las hojas de la especie son comúnmente empleadas para el tratamiento de úlceras, asma, problemas gastrointestinales, antialcohólico, entre otros. Sin embargo, esta especie actualmente se encuentra en peligro de extinción en Brasil. Con el objetivo de obtener los principios activos responsables de la actividad anti-ulcerosa con un menor impacto sobre esta especie es que se emplea la biotécnica de cultivo in vitro para la obtención de callos formados a partir de las hojas de Jodina rhombifolia. Los experimentos se realizaron con hojas y tallos de la especie en los siguientes estados vegetativos: juvenil, intermedio y maduro. La mayoría de los ensayos realizados con el material vegetal maduro fueron infructuosos debido a la contaminación de los explantos por hongos y bacterias. Mientras que al trabajar con el material vegetal juvenil se logró obtener una buena desinfección para los tres tipos de explantos ensayados (hojas y secciones nodales con y sin hojas), lo cual permitió llegar a la etapa de inducción de callos, empleando el medio de cultivo Murashige & Skoog (1962) suplementado con 2, 4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) como regulador de crecimiento. La formación de los callos a partir de las hojas juveniles se observó que es un proceso lento, mientras que para las secciones nodales se obtuvo una respuesta considerablemente más rápida, en especial para las secciones nodales con hojas. Asimismo, también se observó que los explantos provenientes de las hojas juveniles tienen una mayor tendencia a oxidarse que las hojas intermedias y maduras, sin embargo la desinfección de estas últimas es compleja debido a la presencia de hongos y bacterias. Se realizó la identificación de algunas C-glicosilflavonas, compuestos responsables de la actividad anti-ulcerosa de la especie, por medio de cromatografía en capa fina (CCF) para diversos extractos obtenidos a partir de las hojas maduras de la especie, en los cuales se encontró la presencia isovitexina, la cual no había sido descrita para la especie. Adicionalmente, se obtuvieron extractos de los callos obtenidos a partir del cultivo in vitro, los cuales fueron comparados por CCF frente a extractos provenientes del material vegetal juvenil de la especie y testigos de C-glicosilflavonas, lo que permitió identificar la presencia de C-glicosilflavonas en los extractos butanólico y acetato de etilo del material vegetal juvenil, y en el extracto de acetato de etilo de callos. Adicionalmente, la información referente a la constitución química de esta especie es escasa por lo que se realizaron reacciones de caracterización para flavonoides, terpenos y esteroides. En estas se encontró la presencia de esteroides en el extracto diclorometánico, y flavonoides en los extractos hidroalcohólico y diclorometánico. Asimismo, fue posible lograr una clara diferenciación por medio de CCF entre Jodina rhombifolia y Maytenus ilicifolia (congorosa), conocido adulterante de la especie principalmente cuando esta se presenta triturada o en polvo.