Identificación de inhibidores peptídicos de proteasas con potencial aplicación biomédica obtenidos a partir de Solanum tuberosum subespecie andígena variedad Imillanegra (papa andina)

Abstract

En este trabajo de tesis se obtuvieron los siguientes resultados: - Se obtuvieron extractos crudos en distintos buffers. Cada extracto fue caracterizado por electroforesis e isoelectroenfoque. - Se realizaron medidas de inhibición frente a diferentes tipos de proteasas con el fin de tener un buen espectro y de abarcar varios tipos mecanísticos de enzimas. - Los extractos crudos tuvieron actividad inhibitoria de carboxipeptidasa A, tripsina, papaína y subtilisina. - El inhibidor de tripsina fue parcialmente purificado y caracterizado a partir del extracto crudo. - El inhibidor fue caracterizado por electroforesis e isoelectroenfoque (peso molecular 20168 Da, pI bajo a partir del tratamiento del E.C. a 70ºC). - Algunos inhibidores, los menores a 20 kDa, son estables a altas temperaturas, ya que resistieron un tratamiento térmico de 70ºC durante 60 minutos recuperándose un alto porcentaje de la actividad inhibitoria. - Los inhibidores de tripsina de 21 kDa son estables a un tratamiento térmico a 60ºC durante una hora, pero a 70ºC dejan de ser estables. - Se han identificado en estos extractos, a partir de una huella peptídica de una digestión tríptica de cada una de las bandas del SDS-PAGE, los distintos componentes mayoritarios presentes en dicho extracto. - Mediante la técnica proteómica PMF/MALDI-TOF/MS se pudo identificar un inhibidor de proteasa serínica tipo KUNITZ de 21 kDa. - Mediante la técnica proteómica PMF/MALDI-TOF-TOF/MS-MS se pudo identificar el mismo inhibidor de proteasa serínica tipo KUNITZ de 21 kDa. - Mediante la técnica proteómica “Intensity Fading MALDI-TOF/MS” se pudo encontrar un inhibidor de tripsina de 20168 Da diferente del inhibidor hallado anteriormente que posee una masa de 21 kDa.