Metodología para la preparación y fraccionamiento sistemático de extractos vegetales con miras a su ensayo farmacológico y eventual estudio químico

Abstract

Se describe un método para operar con material vegetal, utilizable sistemáticamente en su extracción y fraccionamiento y en la vehiculización de extractos, fracciones y sustancias aisladas. El método de extracción se basa en la percolación continua por medio de un sistema de reciclado de cada disolvente, combinado con el uso sucesivo de disolventes de polaridad creciente, obviando retirar y evaporar el marco con cada cambio. Los extractos son llevados a sequedad sobre un polvo inerte y se fraccionan por la acción de disolventes de polaridad creciente sobre los sólidos así depositados. Estas fracciones, que difieren netamente una de otra, son también evaporadas sobre polvo inerte y el producto resultante colocado en la parte superior de una columna Los solutos así sembrados son separados por cromatografía relámpago. Todas las operaciones son seguidas por cromatografía en capa fina con ayuda de minicromatofolios, que también se utilizan para calcular el volumen de retención de las sustancias en las columnas. Para la purificación eventual de alguna fracción especialmente dificultosa, se recurre a la cromatografía de alta perfomance preparativa. Además se describe la técnica adaptada para la vehiculización de extractos y fracciones por medio de la coprecipitación con povidona y dispersión en agua, con el objeto de seguir el fraccionamiento conjuntamente con el ensayo de los extractos, fracciones o sustancias en animales de laboratorio. La técnica normalizada que se describe permite operar sencilla y sistemáticamente con diversas muestras vegetales en la búsqueda y aislamiento de sustancias farmacológicamente activas. La adopción de un sistema extractivo líquido/sólido, unido a la fácil disponibilidad de las sustancias cuando se hallan depositadas sobre un material inerte, permite producir fracciones de alta concentración, con el correspondiente ahorro de tiempo y disolventes.

A method is described for the systematic extraction, fractionation and vehiculization of plant material with the object of following its pharmacological activity along the different steps. The extraction is run with various solvents. Each step consists in the recycling of one of the solvents by continuous percolation until finishing an exhaustive extraction. They are passed succesively in order of increasing polarity. The marc is not evaporated when changing solvents. All the extracts are taken to dryness on an inert powder and, after that, fractionated by using low volumes of solvents of increasing polarity, the eluted from each being cut as a fraction, clearly different from the precedent one. At this time, each fraction is again taken to dryness as described, and the resulting powder put on top of a column and subdivided by using flash chromatography. All the operation is controled with minichromatofolia: adsorption chromatography serves also to calculate the retention volumes and to monitor the columns. The eventual purification of any difficult sample is carried out by using preparative high performance liquid chromatography. A technique has been adapted to be able to disperse in water the different extracts, fractions or substances. It is based in coprecipitation with povidone and allows for the simultaneous monitoring of their pharmacological activity. The method thus standarized permits to operate systematically in the analysis of plant material to look for and isolate biologically active substances. The adoption of a liquid/solid extraction system, together with the facile disponibility of all substances due to their deposition on aIl inactive powder, allows for the preparation of concentrated fractions with the advantage of saving both time and solvents.