La mastitis es una patología habitual en los rodeos lecheros y constituye una importante causa de pérdidas productivas y de rentabilidad. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar por pruebas fenotípicas microorganismos asociados a mastitis subclínica y clínica en leche cruda. El trabajo fue realizado en un tambo de 40 vacas Holando Argentino en ordeñe y con una producción promedio anual de entre 18 y 22 litros por vaca por día. El muestreo se realizó por treinta días consecutivos tomando una muestra diaria. Las mismas fueron sembradas en agar sangre, manitol salado, agar Levine Eosina-Azul de Metileno, TKT y agar Tripticasa Soya. Primero se hizo una clasificación por medio de la coloración de Gram, luego para las primeras se usaron pruebas de catalasa, coagulasa y CAMP; y para las Gram negativas las pruebas fueron UREA, Sulfide-Indole-Motility, Triple SugarIron Agar, Citrato de Simmons, LisynIron Agar, Rojo de Metilo-VogesProskauer. Los resultados revelaron que las bacterias aisladas que aparecieron con mayor frecuencia (100%, totalidad de los muestreos) fueron Staphylococcus aureus, Streptococcus spp. (uberis o disgalactiae) y agalactiae, Escherichia coli y Enterobacter cloacae; medianamente frecuente Hafnia alvei; poco frecuente Citrobacter spp y no se identificó en ningún muestreo el género Pseudomonae. Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae son considerados patógenos causantes de mastitis contagiosa evidenciando que en el rodeo en estudio había vacas infectadas. Deberá trabajarse en la implementación de un control bacteriológico periódico de leche cruda sumado al recuento de células somáticas para utilizarlo como control de vacas infectadas y que pueden generar mastitis clínicas y subclínicas, patologías que ocasionan pérdidas económicas importantes. Además, debe también ponerse especial atención en hacer conocer el impacto de la higiene sobre esta enfermedad, práctica que permite tener controlada una mastitis de tipo medio ambiental.