Evidencias bioquímicas y moleculares del efecto de compuestos naturales sobre un novedoso blanco terapéutico para aterosclerosis

Abstract

La aterosclerosis es una enfermedad cardiovascular caracterizada por un engrosamiento de las paredes arteriales debido al depósito de lípidos, principalmente el colesterol (Col), y a una respuesta inflamatoria crónica promovida por macrófagos y células espumosas. Los niveles de Col plasmático se regulan por mecanismos como la síntesis de novo del Col o vía del mevalonato (VM). En las primeras etapas de la VM (reacciones pre-escualeno) se generan isoprenoides no esteroideos como ubiquinona, dolicol y grupos prenilos. La enzima óxido escualeno ciclasa (OSC) es quien cataliza la ciclación del escualeno para formar lanosterol, que es el primer componente cíclico de la VM del cual derivan todos los esteroides. La inhibición de la OSC representa un blanco terapéutico muy prometedor como agente hipocolesterolemiante debido a que interviene en una reacción post-escualeno, lo que implicaría inhibir la síntesis de Col sin afectar la de moléculas no esteroideas. Asimismo, su inhibición parcial produce oxiesteroles, que son fuertes ligandos del receptor nuclear LXR involucrado en la regulación de la expresión de enzimas de la vía de síntesis de triglicéridos (GPAT) y de proteínas ABC responsables del transporte reverso del Col. El aceite de cáscara de mandarina (ACM) posee compuestos naturales, mayoritariamente limoneno (Li), con potencial actividad hipocolesterolemiante y antiaterogénica. Objetivo: Evaluar el efecto del ACM sobre el metabolismo lipídico en hepatocitos y macrófagos, células que cumplen un rol fundamental en la regulación de la homeostasis del Col y del proceso inflamatorio en lesiones vasculares, para encontrar nuevos blancos terapéuticos antiaterogénicos de baja toxicidad. Se utilizaron concentraciones de 0-100 μL/L de ACM y Li en una línea celular proveniente de un hepatoblastoma humano (HepG2) y una línea tumoral de macrófagos murinos (Raw 264.7). Las HepG2 fueron incubadas las últimas 3 hs de tratamiento con 14C-acetato. Los lípidos fueron extraídos, separados e identificados por TLC, cuantificados en contador de radiactividad y analizados en equipo Storm. Las Raw 264.7 se diferenciaron de macrófagos a células espumosas incubando 8 hs con LDLox (50 μg/mL). El contenido lipídico teñido con Oil-Red-O se analizó por espectrofotometría. La expresión de la enzima GPAT3 y del receptor CD36 se cuantificó por RT-qPCR. Se observó que concentraciones menores a 60 μL/L del ACM y Li en las células hepáticas inhiben la síntesis de Col pero incrementan los niveles de incorporación de 14C-acetato en productos de reacciones pre-escualeno. En células espumosas disminuyen los depósitos de lípidos intracelulares y la expresión de receptores CD36 pero aumentan los niveles de GPAT3. Mayores concentraciones del ACM mostraron una disminución en la incorporación del 14C-acetato en Col, en todos los intermediarios de la VM y en distintos glicerolípidos. Los depósitos lipídicos en las células espumosas disminuyeron significativamente sólo en las células tratadas con el ACM. Conclusiones: El ACM disminuye la síntesis de Col y los depósitos de lípidos intracelulares sugiriendo una inhibición de la enzima OSC principalmente por el Li. Estos resultados constituyen evidencias muy alentadoras para avanzar con la validación del ACM como inhibidor de la OSC, potencial blanco terapéutico para la prevención y/o tratamiento de la aterosclerosis.