Puesta a punto de una PCR digital (<i>Droplet Digital</i> PCR) para diagnóstico y cuantificación de <i>Staphylococcus aureus</i> productor de mastitis en Uruguay

Abstract

La mastitis bovina producida por Staphylococcus aureus genera grandes pérdidas económicas para el productor lechero. Las técnicas moleculares como la PCR nos han permitido realizar el diagnóstico de una gran variedad de patógenos en distintos tipos de muestras incluyendo la leche. En este contexto, la Droplet Digital PCR (ddPCR) es la última generación de PCR que permite poder amplificar y cuantificar patógenos partiendo de muestras muy complejas o poco concentradas ya que tiene una gran sensibilidad y precisión, comparando con las técnicas existentes (PCR convencional y PCR en tiempo real). El objetivo de este trabajo fue poner a punto una Droplet Digital PCR (ddPCR) para la detección y cuantificación de Staphylococcus aureus a partir de cultivos y de muestras de leche inoculados artificialmente. Partiendo de cultivos puros de la cepa de referencia S. aureus ATCC 6538, se realizó la extracción de ADN genómico que se diluyó de forma seriada en base 10 (-1 a la -6) para su posterior amplificación y cuantificación por ddPCR.