Estudio de los efectos de las hormonas tiroideas sobre la expresión y actividad del canal Hv1 en linfomas de células T

Abstract

Comenzamos este trabajo caracterizando la actividad del canal Hv1 en dos líneas celulares derivadas de PTCLs (HuT78 y Karpas299), motivándonos por reportes previos que indican que la corriente mediada por este canal se encuentra aumentada en la línea celular Jurkat (correspondiente a linfocitos T tumorales), en relación a la corriente observada en en linfocitos T normales. Llamativamente, utilizando la técnica de Patch-Clamp observamos una ausencia de corriente mediada por el canal Hv1 en la línea celular Karpas299, mientras que las células HuT78 presentaron corrientes salientes de H+, dependientes del voltaje y del pH e inhibibles por Cl-GBI, compatibles con corrientes mediadas por el canal Hv1. Esta importante diferencia entre ambas líneas celulares, que no ha sido reportada hasta el momento en literatura, nos llevó a cuestionarnos si la falta de corriente en las células Karpas299 se debía a una ausencia de la expresión del gen HVCN1. Para evaluar esta hipótesis, decidimos caracterizar la expresión del canal Hv1 a nivel transcripcional y proteico tanto en Karpas299 como en HuT78. Los resultados obtenidos demuestran la presencia de ARN mensajero y proteína correspondiente al canal Hv1, en ambas líneas celulares. En concordancia con los resultados obtenidos mediante la técnica de Patch-Clamp, observamos mayores niveles transcripcionales para el gen HVCN1 en las células HuT78 en comparación con las células Karpas299; sin embargo, esta diferencia no se observó al evaluar los niveles proteicos del canal. Debido a que los análisis bioinformáticos realizados sobre las regiones promotoras del gen HVCN1 nos permitieron identificar 3 posibles sitios de unión para los receptores nucleares de HTs, decidimos evaluar los efectos producidos por concentraciones fisiológicas de estas hormonas sobre la expresión del canal Hv1 en ambas líneas celulares, y sobre las corrientes mediadas por el mismo en nuestro modelo de estudio. En este sentido, encontramos que las HTs producen un aumento en la expresión transcripcional del gen HVCN1 en ambas líneas celulares, pero este aumento no se ve reflejado en los niveles de proteína ni en la corriente mediada por el canal.