Analizar las poblaciones de linfocitos B (LB) presentes en el colon y sangre periférica de pacientes pediátricos con alergia alimentaria, en especial LBmem IgE+

Abstract

Dado el aumento de las manifestaciones alérgicas, la severidad de las mismas y la importancia de la IgE como blanco terapéutico, es de gran interés e importancia estudiar los mecanismos responsables de la síntesis, secreción y regulación de esta inmunoglobulina. El principal obstáculo en el estudio de las células B IgE+ humanas radica en la dificultad de detectarlas debido a su baja frecuencia y a que estas células suelen encontrarse en el tejido de origen. Nuestro grupo ha trabajado en el estudio de pólipos juveniles colorrectales (PJs), extirpados como prevención de recidiva, de pacientes pediátricos atópicos que asistieron por proctorragia al Hospital de Niños Sor María Ludovica de La Plata. Los pacientes presentan IgE total elevada tanto en sangre periférica como en pólipos y la mayor parte de ellos muestran también IgE específica a proteínas de leche de vaca, maní y/o soja. Nuestros hallazgos previos han demostrado infiltrados inflamatorios Th2, dominados por células plasmáticas productoras de IgE y eosinófilos sensibilizados. Esto nos permite asociar la condición de atópicos de los pacientes con la presencia de un infiltrado inflamatorio alérgico en la mucosa colónica, y la presencia de centros germinales activos donde hemos demostrado que se sintetiza IgE. A pesar de que no hay evidencias de la diferenciación in vivo de los LB memoria IgE+ humanos, el origen de los mismos puede ser inferido parcialmente a partir del análisis de las mutaciones somáticas, de los productos de recombinación durante el cambio de isotipo y del repertorio de receptores de antígeno o BCR, ambiente propicio otorgado por los centros germinales.Por esto hipotetizamos que durante una respuesta inflamatoria alérgica, la mucosa colónica humana favorece el desarrollo de células B de memoria IgE+ capaces de movilizarse a médula ósea a través de sangre periférica (SP) y a otras mucosas luego de su diferenciación. Para poder evaluar las poblaciones de LB mediante caracterización de marcadores de superficie y análisis de proteínas involucradas en el tráfico celular (receptores de quimoquinas y moléculas de adhesión) se utiliza la citometría de flujo como técnica principal. Para esto diseñamos dos paneles de detección de LBmem IgE+ en lámina propia de PJs y SP utilizando anticuerpos a-CD45 PerCP,a-CD19 V500, a-CD27 APC, a-CD138 PE, a-IgD SB600, el marcador de viabilidad LiveDead violet, a- IgE Bv711 comercial policlonal y el anticuerpo monoclonal humanizado omalizumab A488.