Resistencia derivada del patógeno aplicada al virus de la psorosis de los cítricos

Abstract

Actualmente, no se conocen especies cítricas ni especies relacionas utilizadas como pie en la citricultura que sean resistentes o tolerantes al virus de la psorosis de los cítricos. Por sus características epidémicas, el control de la enfermedad y su erradicación son difíciles de llevar a cabo. La resistencia deriva del patógeno (PDR) se ha aplicado con éxito para el control de diversas enfermedades producidas por agentes virales. En muchos casos la expresión de la proteína de la cápside viral u otras secuencias virales, ha generado resistencia o tolerancia al virus sin producir efectos secundarios. Por lo tanto, uno de los objetivos generales planteado en la presente tesis fue aplicar la estrategia de resistencia derivada del patógeno al virus de la psorosis de los cítricos en búsqueda de resistencia a la enfermedad. Dado que en los virus la información genética se encuentra muy condensada, es frecuente encontrar que la mayoría de sus genes están involucrados en varias de las funciones necesarias para completar el ciclo viral. CPsV posee 4 ORFs determinados a partir del análisis de su genoma, de los cuales, solamente se ha asignado y confirmado su función a la proteína 48K (proteína de cubierta viral) y determinado por homología de secuencia la función de replicasa viral en la proteína 280K. Por lo tanto, además de la función estructural de la proteína 48K es muy probable que participe de otras funciones vitales para la replicación e infección del virus. El análisis de la secuencia nucleotídica de la proteína 280K del RNA1 (RNA polimerasa) y de la proteína 54K parece indicar que podrían ejercer alguna función en el núcleo ya que poseen señales de localización nuclear. En general, el análisis de la localización subcelular de las proteínas virales a posibilitado dilucidar la función de las mismas durante el ciclo vital, por lo cual, se estableció como segundo objetivo general de la tesis estudiar la expresión y/o localización intracelular de las proteínas virales de CPsV. Para lograr dichos objetivos, durante el trabajo de tesis se abordaron diferentes objetivos particulares que se desarrollaron en los capítulos que la conforman: Capítulo 1. Obtención de plásmidos recombinantes utilizados durante el desarrollo de la tesis Capítulo 2. Desarrollo de herramientas y metodologías para la detección de las proteínas 24K, 48K y 54K de CPsV Capítulo 3. Búsqueda de resistencia derivada del patógeno mediante la obtención de cítricos transgénicos conteniendo ORFs de CPsV. Capítulo 4. Estudio de la expresión de la proteínas 24K, 48K y 54K y la localización sub-celular de la proteína de cubierta viral de CPsV. Capítulo 5. Detección de CPsV aplicando el TAS-ELISA-HRP