Aprovechamiento de cascara de huevo como fuente de biomateriales para la regeneración ósea

Abstract

Las cáscaras de huevo constituyen un residuo domiciliario e industrial interesante parasu reaprovechamiento como fuente de colágeno e hidroxiapatita para el desarrollo debiomateriales para la regeneración ósea. El objetivo global del trabajo es obtenercolágeno de tipo 1 para emplearlo como adhesivo natural para mejorar la interaccióncelular con una matriz porosa de quitosano-carboxi metil celulosa, desarrolladapreviamente. En esta primera parte, el objetivo es el aislamiento y caracterización decolágeno tipo 1 a partir de la membrana de la cáscara de huevo.El colágeno fue obtenido a partir de la hidrólisis de las membranas de huevo en0,5%v/v ácido acético a 25°C, bajo agitación a 500rpm durante 10 días. El hidrolizadose filtró y el colágeno se precipitó agregando de sulfato de amonio o cloruro de sodiocon posterior reposo por 24h, luego de lo cual se centrifugó a 10000g. El precipitadose lavó con agua destilada y resuspendió en 0,5M de ácido acético. Las pruebas decaracterización realizadas fueron: contenido total de proteínas por el método deBradford; contenido de colágeno empleando el método de Sirius red; espectroscopíainfrarroja por transformadas de Fourier (FTIR), espectroscopía UV-visible y porelectroforesis en tiras de acetato de celulosa. Se realizaron dos aislamientosindependientes empleando sulfato de amonio (M1) o cloruro de sodio (M2) comoprecipitante. El contenido total de proteínas para M1 fue de 1893 + 64 mg/ml; mientrasque para M2 fue de 1171 + 31 mg/ml. El contenido total de colágeno por muestra fuede 713 + 87 ug/ml para M1 y de 266 + 17 ug/ml para M2. El rendimiento promedioobtenido en la precipitación con sulfato de amonio fue de 22%, mientras queempleando cloruro de sodio fue de 7%. Los espectros UV-visible para las muestraspresentaron una banda de absorción a 273nm. La pureza y estabilidad de la muestrafue estudiada empleando electroforesis en acetato de celulosa, y la identidad porFTIR.En conclusión, nuestros resultados muestran que se pudo obtener, de manera sencilla,colágeno de tipo 1 a partir de membrana óvea. Seleccionamos como método deobtención la purificación con sulfato de amonio por presentar mejores rendimientoscon igual pureza y estabilidad, obteniéndose colágeno de características adecuadaspara la aplicación propuesta. En un futuro se adicionará el colágeno sobre las matricespara evaluar si efectivamente mejora las propiedades de biocompatibilidad de lasmatrices previamente sintetizadas.